TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/L Tris－HCl

1mmol/L EDTA

水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml） pH

8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

76 9.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

2mol/L Tris碱 242g

1mol/L 乙酸    57.1 ml的冰乙酸（17.4mol/L）

100 mmol/L EDTA 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

水补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量

445 mmol/L Tris碱 

445 mmol/L 硼酸盐

10 mmol/L EDTA

水

54g

27.5g 硼酸

20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenol blue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量

0.3 N 氢氧化钠

6 mmol/L EDTA

18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚绿

0.25％二甲苯青FF

水

300ul 10N 氢氧化钠

120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

15％聚蔗糖（400型）

水

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水

2.5ml 1％溴酚蓝

2.5ml 1％二甲苯青FF

1.5g

补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

50％甘油

水

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

3ml

3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

40％聚蔗糖

水

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

4g

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF

200 mmol/L EDTA

0.1％SDS

50％甘油

水

20mg

20mg

4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

100ul 10％ SDS

5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨 10g

酵母提取物 5g

氯化钠 10g

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨 20g

酵母提取物 5g

氯化钠 0.5g

1 mol/L 氯化钾 2.5ml

   用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨 12g

酵母提取物 24g

甘油 4ml

   各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨 16g

酵母提取物 10g

氯化钠 4ml

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨 20g

酵母提取物 10g

葡萄糖 20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

几种溶液的配制方法

1、PBS:

取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。

2、TBS：

2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）

Tris（三羟甲基氨基甲烷） 60.57g

1N HCL 约420ml

双蒸水 加至1000ml

Tris缓冲液配制方法：

先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。

2.2 TBS配方：

Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6） 100ml

NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)

双蒸水 加至1000ml

TBS配制方法：

先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。

3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：

3.1 储存液：

A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7"H20）溶于1000ml蒸馏水中。

B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7"2H20）溶于1000ml蒸馏水中。

3.2 工作液：

0.1 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0

4、胰酶（Trypsin）：

4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：

常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。

4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：

取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

5、胃酶（Pepsin）：

4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。

（我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）

6、DAB：

6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：

使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。

6.1 ZLI-9030 DAB：

6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。

7、AEC：

4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。

8、RIPA：

1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。

8.1 10mg/ml l/ml）PMSF异丙醇溶液（用量为10

l/ml）8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30

8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液

l/ml）（用量为10

9、Blotto A：

常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。

10、Blotto B：

与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。