SAINT-BIO/尚宝生物 26225 粪便基因组DNA提取试剂盒

粪便基因组DNA提取试剂盒

产品货号：26225

产品规格：50T/100T

产品简介：

本试剂盒适用于各类粪便样本的基因组DNA提取。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，配合本公司独特的缓冲液配方可有效去除动物粪便中各种影响下游实验的抑制因子，并能高效地回收粪便中的基因组DNA。提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种下游应用实验，如酶切、PCR、文库构建等。

产品组成：

实验前准备：

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，1.5mL离心管，无水乙醇等。

2. 所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. Γ使用前，在漂洗液W瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现漂洗液W由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W中的乙醇含量。

操作步骤：

一、样本预处理：

1. 取约200mg粪便，转移至2mL离心管中，并置于冰上。

2. 加入1.4 mL裂解液LB，涡旋振荡1min，彻底混匀。

注：若粪便样本为冰冻样本，加入裂解液LB前，不宜解冻。

注：为保证彻底混匀，可适当延长涡旋振荡时间。

3. 70℃水浴或金属浴5min。

注：针对含革兰氏阳性菌等较难裂解的粪便样本，可提高温度至95℃。

4. 振荡混匀15sec，室温放置1min。12,000rpm离心1min沉淀粪便颗粒。转移900μL上清液，至1.5 mL离心管中。

5. 加入100μL杂质去除剂，立即涡旋振荡至彻底混匀。室温放置1min，12,000rpm离心3min，去除杂质。

6. 转移上清至1.5mL离心管中，12,000rpm离心3min。

7. 取步骤6中的210μL上清液至1.5mL离心管中，加入20μL Proteinase K (20mg/mL)，充分混匀。

8. 加入200μL结合液BD，立刻振荡混匀，70℃水浴或金属浴10min。

注：为获取更高产量，可以转移更多上清液，同时按比例增加Proteinase K (20mg/mL)、结合液BD及后续异丙醇用量。

二、DNA提取：

1. 将DNA吸附柱S2套入2mL收集管中，备用。

2. 加入100μL缓冲液AC至DNA吸附柱S2中，12,000rpm离心1min，弃掉废液。

3. 加入100μL异丙醇（自备）至上述预冷后的样本预处理混合液中，立即振荡混匀，短暂离心收集管盖内的液体。

注：可能会形成絮状沉淀，属于正常现象。

4. 将上述混合物加入DNA吸附柱S2中，12,000rpm离心1min，弃掉废液。

5. 加入500μL去蛋白液PL，12,000rpm离心30sec，弃掉废液。

6. 将DNA吸附柱S2放回收集管中，加入600µL漂洗液W，12,000rpm离心30sec，弃废液。

注：确保漂洗液W已添加无水乙醇。

7. 重复一遍步骤6。

8. 将DNA吸附柱S2放回收集管，空柱12,000rpm室温离心2min，以除去残留的漂洗液W。

9. 将DNA吸附柱S2放入新的1.5mL离心管中，在膜中央加入50-150µL洗脱液，室温放置5min。然后12,000rpm 离心1min。收集滤液，即为DNA溶液。

注：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2min后，洗脱。

10. DNA溶液可置于-20℃长期保存。

注意事项：

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 裂解液LB和结合液BD低温时可能析出，可70℃温浴复溶至溶液澄清，不影响使用效果。

3. 杂质去除剂和结合液BD含有刺激性物质，为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

运输及保存：

1. Part I 组分冰袋运输，4℃可保存12个月，-20℃保存2年。

2. Part II 组分常温运输，常温保存，有效期12个月。