SAINT-BIO/尚宝生物 BA1859 乙酰胆碱酯酶染色试剂盒（金属沉淀法）

乙酰胆碱酯酶染色试剂盒（金属沉淀法）

产品货号：BA1859

产品规格：3×20ml

产品简介：

胆碱酯酶(cholinesterase)属于特异性酯酶，可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase AChE)又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的调节作用；另一类称为假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase，PsChE)，能水解其他胆碱脂类如琥珀胆碱。乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内，生理功能尚不明确。显示乙酰胆碱酯酶的方法有Koell法、Snell和Garrett法、Karnovsky和Roots法等。

乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(金属沉淀法)染色原理是真性胆碱酯酶水解专一性底物释放硫代胆碱，硫代胆碱的硫醇基团可以和重金属离子形成初级络合物沉淀，散在的分布在酶活性位点及其周围，经充分清洗去杂后初级沉淀与硫化液发生复分解，生成更精细准确的二次沉淀定位。其优点是操作简便、酯酶的扩散较少，其缺点是对底物对组织的渗透性较差，对操作者经验要求较高，有可能出现假阳性。

自备材料:

10%甲醛钙固定液、恒温培养箱、光学显微镜。

产品组成：

操作步骤(仅供参考)： 

1. 冰冻切片，推荐厚6-12μm，不固定直接复温晾干或置于预冷的10%甲醛钙固定液固定10-15min。

2. 蒸馏水洗2次，每次3min。

3. 配制AChE孵育液：临用前，取500μl试剂(A2)：AChE缓冲液A加入至试剂(A1)：AChE碘化底物中，吹打数次使后者完全溶解后全部吸出转移至A2瓶中混匀，即为A12混合液，保存见注意事项2。取适量的A12混合液、A3、A4、A5放置复温后，按A12混合液:A3:A4:A5=46:2:2:1充分混合制备AChE孵育液，建议3h内使用。

4. 切片入恢复室温的AChE孵育工作液中，37℃避光孵育10-30min。

5. 蒸馏水洗5min，镜下观察如活性部位仍较淡，可于蒸馏水洗后再新配孵育液进行孵育，至合适为止。

6. 入AChE漂洗液充分漂洗，如AChE漂洗液用量过大，可用PBS代替。

7. 在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取适量的试剂C用蒸馏水或者去离子水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入ALP硫化工作液孵育。(见注意事项3)

8. 流水冲洗10min。甘油明胶封片。

染色结果：

阴性对照(可选)：

取配制好的AChE孵育工作液，按AChE孵育工作液:AChE-ChE抑制剂=50:1充分混合。取相同切片入含AChE-ChE抑制剂的AChE孵育液中，其余同上，呈阴性反应。

注意事项： 

1. 本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。

2. A12混合液可在2-8℃保存1周，如需长期保存建议分装成小规格放置-20℃保存。A5同理，长期保存建议分装冻存，避免反复冻融对染色的影响。

3. 试剂C：AChE硫化液有强列气味，建议在通风橱进行稀释或染色操作。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。