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产品基本说明:
本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化70 bp-30 kb的DNA片段,溶胶速度快,回收率高。溶胶液中含有pH指示剂,可根据颜色来判断溶胶回收是否达到Γ佳状态。每个吸附柱可吸附高达10μg的DNA,同时有效去除引物、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。 |
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
产品货号:27101
产品规格:50次/100次/200次
产品简介:
本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化70 bp-30 kb的DNA片段,溶胶速度快,回收率高。溶胶液中含有pH指示剂,可根据颜色来判断溶胶回收是否达到Γ佳状态。每个吸附柱可吸附高达10μg的DNA,同时有效去除引物、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
产品内容:
产品名称 | 50次包装 | 100次包装 | 200次包装 | 储存条件 |
Buffer PG | 12ml | 23ml | 45ml | 室温 |
Buffer PS | 12ml | 23ml | 45ml | 室温 |
Buffer PW | 9ml | 18ml | 36ml | 室温 |
Buffer EB | 5ml | 10ml | 20ml | 室温 |
Spin Columns | 50个 | 100个 | 200个 | 室温 |
Collection Tubes | 50个 | 100个 | 200个 | 室温 |
自备试剂:使用前Buffer PW 50次加入36ml无水乙醇/100次加入72ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇。
操作步骤:
1. 将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
2. 注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。
3. 向胶块中加入2倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg,其体积可视为200μl,依此类推)。
4. 57℃水浴温育,其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管,待溶胶液为黄色,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
5. (可选步骤)当回收片段<300 bp时,应加入1/2胶体积的异丙醇,上下颠倒混匀(如凝胶重100 mg,则加入50μl的异丙醇)。
6. 柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入200μl Buffer PS,12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7. 将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
8. 注意:吸附柱容积为750μl,若样品体积大于750μl 可分批加入。
9. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
10. 注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
11. 重复步骤7。
12. 12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
13. 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
14. 将吸附柱放到一个新的1.5 ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB,室温放置2分钟。12000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1. 为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,室温放置2分钟,12000 rpm离心1分钟。
2. 洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。
3. 回收大于10 kb的DNA片段时,Buffer EB应在57℃水浴中预热,可增加回收效率。
备注:
本试剂盒也适用于PCR产物的纯化回收。在PCR反应液中加入等体积的Buffer PG,充分混匀(对于回收小于150bp的小片段可将溶液的体积增加到3倍以提高回收率)接上述步骤5进行后续操作。
注意事项:
1. Γ次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
2. 使用前请检查Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。
3. 电泳时Γ好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验要求较高,请尽量使用TAE电泳缓冲液。
4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
6. 将水浴锅预热至57℃。
7. 所有离心步骤均可室温下进行。
产品介绍: