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产品基本说明：
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本试剂盒用于定量分析细胞及酶水平的过氧化氢含量。 在过氧化物酶的存在下，Reagent A能够与过氧化氢以1：1的比例反应，生成物有红色荧光，该荧光可在激发光571nm，发射光585nm处被监测（激发光亦可用530-571nm波长激发，发射光可用580-590nm监测）。 本试剂盒Γ低检测限为50nM过氧化氢。 |
荧光/光吸收法过氧化氢定量试剂盒
产品货号：26310
产品规格：100次/500次
产品简介：
本试剂盒用于定量分析细胞及酶水平的过氧化氢含量。
在过氧化物酶的存在下，Reagent A能够与过氧化氢以1：1的比例反应，生成物有红色荧光，该荧光可在激发光571nm，发射光585nm处被监测（激发光亦可用530-571nm波长激发，发射光可用580-590nm监测）。
本试剂盒Γ低检测限为50nM过氧化氢。
包装清单:
产品信息 | 100次包装 | 500次包装 | 储存条件 |
Reagent A | 0.05ml | 0.25ml | |
Reagent B | 0.05ml | 0.25ml | -20℃ |
10×Reaction Buffer | 1.2ml | 6ml | 室温 |
10×KRPG Buffer | 3.5ml | 7ml | 室温 |
操作步骤：
1. 普通样品过氧化氢含量测定:
2. 用超纯水将10×Reaction Buffer稀释为1×Reaction Buffer。
3. 于96孔板中每孔加入94μl 1×Reaction Buffer。
4. 于96孔板中加入5μl样品，不足5μl的用1×Reaction Buffer补足5μl。
5. 于96孔板中加入0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B。
6. 37℃避光孵育5min。
7. 用酶标仪激发光571nm，发射光585nm检测（激发光亦可用530-571nm波长激发，发射光可用580-590nm监测），分析数据。
8. 可选：除步骤6所示荧光检测，亦可在560nm处检测吸光度以用于数据分析。
9. 背景扣除：除待测样品孔，需做空白孔（用5μl 1×Reaction Buffer代替样品）检测背景值。
细胞内过氧化氢含量测定：
1. Reaction mixture制备：每个样品准备100μLReaction mixture。包含：0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B，10μl 10×KRPG Buffer，89μl超纯水。根据实验样品数，准备适量Reaction mixture。
2. 将100μl Reaction mixture加入96孔板中，37℃避光孵育5min备用。
3. 细胞样品制备：准备收集约1.5×104个细胞于1.5ml离心管中，PBS清洗后3000rpm离心5min，
4. 弃上清。
5. 加入20μL KRPG buffer悬浮的细胞（约1.5×104个细胞）于步骤2的96孔板中，37℃避光孵育10min。如需空白对照，以20μL KRPG buffer代替细胞，作为空白对照孔。
6. 用酶标仪激发光571nm，发射光585nm检测（激发光亦可用530-571nm波长激发，发射光可用580-590nm监测），分析数据。
7. 可选：除步骤5所示荧光检测，亦可在560nm处检测吸光度以用于数据分析。
注意事项 ：
1. Reagent A和Reagent B为光敏试剂，请避光保存。
2. 待测样品中，DTT或β巯基乙醇浓度不得高于10μM。
3. 待测样品pH值需小于8.5。
4. 建议每次使用前用过氧化氢做标准曲线。
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