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产品基本说明：
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提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存； 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； 试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2.5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； 试剂四：粉剂×3支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； 试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加10 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 |
3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性检测试剂盒
（紫外分光光度法）
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品货号：BA1003
产品规格：50管/48样
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2.5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×3支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加10 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
产品说明：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，也是生物得以生存的关键酶。广泛存在于动植物和微生物体内，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，引起340nm处的吸光度下降，即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
血清/血浆：直接检测。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 工作液的配制：按照蒸馏水：试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=6:10:2:1:1:4 的体积比例充分混匀，现用现配。
3、 操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：
试剂名称（µL） | 空白管 | 测定管 |
工作液 | 900 | 900 |
样本 | 100 | |
蒸馏水 | 100 | |
在1mL石英比色皿中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5min，拿出迅速擦干测定310s时的吸光值A2，计算△A测定管= A1测定-A2测定，△A空白管=A1空白-A2空白，△A=△A测定管-△A空白管。空白管只需做一次。 | ||
三、PGK 活性计算：
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（U/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样×Cpr) ÷T＝321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗 1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（U/g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(W×V样÷V样总) ÷T＝321.54×ΔA÷W
（3）按液体体积计算：
酶活单位定义：每mL血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（U/g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷V样÷T＝321.54×ΔA÷W
（4）按细胞数量计算：
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（U/g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(500×V样÷V样总)÷T＝0.643×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，1×10-3L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；
V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：500万个细胞；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
注意事项：
1、△A大于0.8或者A1测定小于0.9时，建议将粗酶液用提取液稀释后再进行测定。当△A小于0.01时，可以延长反应时间（10min或15min）或增加样本体积来测定。
2、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
3、样品的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有较高的蛋白浓度（约10mg/mL），所以测定样品蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。
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