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产品基本说明：
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AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸（G-1-P）与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。 AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6- 磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。 |
ADPG焦磷酸化酶（AGP）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）产品货号：BA1035
产品规格：50管/48样
产品说明:
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸（G-1-P）与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6- 磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体50mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 液体20mL×1瓶 | 4℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
试剂三 | 粉剂×2瓶 | 4℃ |
试剂四 | 粉剂×2支 | -20℃ |
试剂五 | 液体250μL×2支 | -20℃ |
溶液的配制：
试剂二：临用前每支加入8mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；
试剂三：临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；
试剂四：临用前每支加入500μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步驟
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂（μL） | 测定管 |
试剂一 | 100 |
试剂二 | 160 |
样本 | 20 |
混匀，30℃保温15min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅 速冷却。试剂一、试剂三置37℃保温10min以上。 | |
试剂一 | 300 |
试剂三 | 100 |
试剂四 | 20 |
试剂五 | 10 |
混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
三、AGP活性计算
1. 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（Cpr×V样本）=380.5×ΔA÷Cpr
（此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度）
2. 按照样本质量计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP活性（U/g 质量）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取）=380.5×ΔA÷W
T：反应时间，15min；ε：NADPH消光系数，6.22×10-3mL/nmol/cm；V反总：反应总体积，0.71mL；d：石英 比色皿光程，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.02mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2。
产品介绍：
