SAINT-BIO/尚宝生物 BA1041 ATP含量检测试剂盒（紫外分光光度法）

ATP含量检测试剂盒（紫外分光光度法）

产品货号：BA1041

产品规格：50管/48样

产品内容：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入7mL蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；

试剂三：液体8mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×2支，-20℃保存。临用前每支加入0.4mL蒸馏水溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入3.2mL蒸馏水；

试剂六：粉剂×2支，-20℃保存。临用前加入0.5mL蒸馏水 备用，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

标准品：粉剂×1支，-20℃保存。5mg ATP，临用前加入0.826mL 蒸馏水配成10μmol/mL的ATP标准溶液。

产品说明：

ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反应ATP含量。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水和氯仿。

操作步骤：

一、ATP的提取：

1、血清（浆）中ATP的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为 1：5～10的比例（建议取约0.1mL 血清（浆），加入1mL提取液），充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入

50μL的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2、组织中ATP的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，8000g4℃离心10min，取上清至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3、细胞或细菌中ATP的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500～1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度 20％或200W，超声2s，停1s），10000g4℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

二、测定步骤： 

1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2、将10μmol/mL的ATP标准溶液用蒸馏水稀释16倍即0.625μmol/mL标准溶液备用。

3、工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五（mL）：试剂六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1的比例配制，现配现用。

4、样本测定：

三、ATP含量计算

1、血清（浆）中ATP含量计算

ATP 含量(μmol/mL) =ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×（V提取+V血清（浆））÷V血清（浆）

=6.875×ΔA测定÷ΔA标准

2、组织、细菌或细胞中ATP含量计算

（1） 按样本鲜重计算

ATP含量（μmol/g 鲜重）= ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W

=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W

（2） 按细菌或细胞密度计算

ATP 含量(μmol/10⁶ cell）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷5

=0.125×ΔA测定÷ΔA标准

C标准管：标准液浓度，0.625μmol/mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；V血清（血浆）：血清（浆）体积，0.1mL；W：样本质量，g；5：细胞或细菌总数，5×10⁶个。

注意事项：

1、 加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。

2、 提取过程严格在冰浴条件下进行。

3、 当吸光值大于1.2或者ΔA测定大于1.2时，可以将样品稀释后进行测定。若吸光值小于0.01，则可以增加反应时间（5min或10min）来测定，标准品需要增加同样的反应时间。