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产品基本说明：
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蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys是Γ一种含有巯基的含硫 氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮Γ下层的色素细胞生成的底层黑色 素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。 Cys还原磷钨酸生成钨蓝，在600nm处有吸收峰；通过测定600nm吸光度，计算Cys含量。 |
半胱氨酸（Cys）含量检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA1048
产品规格：100管/96样
产品说明：
蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys是Γ一种含有巯基的含硫 氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮Γ下层的色素细胞生成的底层黑色 素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys还原磷钨酸生成钨蓝，在600nm处有吸收峰；通过测定600nm吸光度，计算Cys含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体50mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 液体15mL×1瓶 | 4℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 4℃ |
试剂三 | 粉剂×1支 | 4℃ |
溶液的配制：
1. 试剂二：用前一天，向试剂二中加2mL蒸馏水充分溶解，再加磷酸0.5mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴2h；冷却后加8mL蒸馏水，4℃可保存2周。
2. 标准品：10mg半胱氨酸。将标准品加入4.13mL蒸馏水，可得到20μmol/mL的标准液。4℃可以保存4周。
技术指标：
Γ低检出限：0.0066μmol/mL
线性范围：0.03125-3μmol/mL
所需的仪器和用品：
低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏 水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 液体样本中半胱氨酸提取：取0.2mL液体样本，加提取液0.3mL，充分混匀，11000rpm 4℃离心10min，取上清液待测。
2. 组织中半胱氨酸提取：称取约0.2g组织，加入提取液0.5mL，冰上充分研磨，11000rpm 4℃离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到600nm，蒸馏水调零。
2. 标准液的配制：将标准品加入0.826mL蒸馏水，可得到100μmol/mL的标准液，然后用蒸馏水稀释为2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL浓度的标准溶液。
3. 按下表步骤加样：
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
工作液 | 40 | - | - |
标准品 | - | 40 | - |
蒸馏水 | - | - | 40 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
试剂二 | 60 | 60 | 60 |
混匀后室温静置15min，于600nm处测定吸光值。
三、半胱氨酸含量计算
1. 标准曲线的绘制：
以各标准溶液浓度为x轴，以∆A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A 对照管）带入方程求x值。
2. 半胱氨酸含量计算：
（1）按液体样本的体积计算
半胱氨酸含量（μmol/mL）=x×V样总÷V样1= 2.5x
（2）按样本质量计算
半胱氨酸含量（μmol/g 质量）= x×V样2÷（W×V样2÷V样总）=0.5x÷W
V样1：提取体系中加入的样本体积，0.2mL；V样2：反应体系中加入的样本体积，0.04mL；V样总：提取体系体积，0.5mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
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