SAINT-BIO/尚宝生物 BA1054 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒（微量法）

苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒（微量法）

产品货号：BA1054

产品规格：100管/96样

产品说明：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动 物体内尚未发现。与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常 生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有Γ大吸收值，通过测定吸光值升高速 率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

试剂二：临用前每瓶加入4mL双蒸水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存一周。

 所需的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、 冰和蒸馏水。

测定步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤 

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2. 操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）

3. 混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做1-2次）

三、PAL活性计算 

a、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活性单位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷0.1÷（Cpr×V样）÷T =13.33×ΔA÷Cpr

（2）按按样本质量计算

单位的定义：每g组织在每mL反应体系中分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活性单位。

PAL（U/g质量）=ΔA×V反总÷0.1÷（V样÷V提取×W）÷T =13.33×ΔA÷W

V样：加入样本体积，5µL=0.005mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，200µL=0.2mL； T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

b、用96孔板测定的计算公式如下 

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.05定义为一个酶活性单位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷0.05÷（Cpr×V样）÷T =26.67×ΔA÷Cpr

（2）按按样本质量计算

单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.05定义为一个酶活性单位。

PAL（U/g 质量）=ΔA×V反总÷0.05÷（V样÷V提取×W）÷T =26.67×ΔA÷W

V样：加入样本体积，5µL=0.005mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，200µL=0.2mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。