SAINT-BIO/尚宝生物 BA1562 丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测试剂盒（单试剂速率法）

丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测试剂盒（单试剂速率法）

产品货号：BA1562

产品规格：100ml/200ml

产品简介：

转氨酶是催化α -氨基酸和α -酮酸之间氨基转换反应的一组酶，丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内，细胞内 ALT 浓度远高于血清，肝细胞破坏后血清ALT立即迅速升高，因此谷ALT被Γ卫生组织推荐为肝功能损害Γ敏感的检测指标。

尚宝丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α -酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与NADH经LDH催化生成NAD⁺，上述方法实际为ALT速率法，其反应公式如下：L-丙氨酸+α -酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD+。

在上述偶联反应中NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在340nm处吸光度下降速率(-Δ A/min)，下降速率(-Δ A/min)与ALT活性呈正比，进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成

自备材料：

1. 蒸馏水

2. 比色杯

3. 分光光度计或自动分析仪

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于 ALT/GPT的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT含量。

2. 分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。注意：由于酶促反应时间极短，尚宝立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1~2min内，其后反应趋于平缓。尚宝对照检测参考值在1~3min变化为1.1~0.8之间。由于检测仪器、操作手法以及样品酶活性高低等条件的不同，参考值范围会有波动如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

对于量程比较大的比色杯，其加样量应相应增多，检测样本量则对应减少；对于量程比较小的比色杯，其加样量应相应减少，检测样本量则对应增加。

3. 生化分析仪检测：按照下表设置主要参数，如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

计算：

分光光度计计算公式：ALT(U/L)=Δ A/ min×(10⁶/6220)×(945/45)=Δ A/ min×3376

式中：6220= NADH的吸光度

945=反应液的总体积(μl)

45=待测样品体积(μl)

生化分析仪计算公式：ALT(U/L)=Δ A/ min×(10⁶ /6220)×(315/15)=Δ A/ min×3376

式中：Δ A/min=测定的340nm吸光度的升高速率

6220= NADH的吸光度

315=反应液的总体积(μl)

15=待测样品体积(μl)

参考范围： 成年健康人血清ALT：0~40U/L

性能指标：  空白吸光度值≥1.0

空白测定值≤5U/L

线性范围：0~1000U/L

批内 CV<6.0%

批间相对 CV<10 %

灵敏度：10U/L

注意事项 ：

1. 抗坏血酸≤40mg/dl，游离胆红素≤40mg/dl，结合胆红素≤40mg/dl，血红蛋白≤500mg/dl对测定结果无影响。

2. 如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片。

3. 血清中ALT活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。

4. 严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。

有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存；打开包装以后，4℃保存1个月。