SAINT-BIO/尚宝生物 BA1564 丙酮酸检测试剂盒（乳酸脱氢酶微板法）

丙酮酸检测试剂盒（乳酸脱氢酶微板法）

产品货号：BA1564

产品规格：120T

产品简介：

丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用酶催化法，该发是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD⁺ ，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH的减少量，进而计算出丙酮酸含量。

丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)其检测原理是在NADH存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸生成乳酸，同时生成NAD⁺。在中性条件下平衡偏向丙酮酸氧化为乳酸的方向，驱动反应完成。通过分光光度比色法(酶标仪)测定340nm处吸光度的下降速率，据此通过比色分析就可以计算出PA水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成

自备材料：

1. 离心管或小试管

2. 蒸馏水

3. 水浴锅或恒温箱

4. 96孔板

5. 酶标仪或自动分析仪

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 准备样品：

①血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于PA的检测。

③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2. 配制标准品工作液：取丙酮酸标准(25mmol/L) 0.01ml溶解于0.49ml丙酮酸标准稀释液，使浓度达到0.5mmol/L，即为标准品工作液-丙酮酸标准(0.5mmol/L)。4℃避光保存24h有效。

3. 配制PA-LDH显色液(适用于自动分析仪)：取配制好的PA显色液10ml不LDH solution 0.12ml混匀，即为PA-LDH显色液。4℃避光保存24h有效。

4. 酶标仪比色检测：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的 PA 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测Γ好能设置平行孔。

充分混匀，分光光度计检测的340nm吸光度，比色杯光径1.0cm，室温孵育1min后再读取各管吸光度，此后每隔1min读1次吸光度，直至读数稳定，分别为A_空白2、A_标准2、A_测定2。

5. 自动分析仪检测：样品中的 PA 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测Γ好能设置平行管。根据实验室的自动分析仪性能，下列参数仅供参考：

分别检测待测样品管吸光度的下降速率(ΔA u /min)和标准管吸光度的下降速率(ΔA s /min)。

计算： 

分光光度计比色计算公式：

丙酮酸(mmol/L)={(ΔA_测定−ΔA_空白)/(ΔA_标准−ΔA_空白)}×0.05

也可根据NADH毫摩尔吸光度计算：

全血丙酮酸(mmol/L)=(ΔA_测定−ΔA_空白)×(1.56/6.22)

式中：ΔA_测定 =A_测定1−A_测定2

ΔA_空白 =A_空白1−A_空白2

ΔA_标准 =A_标准1−A_标准2

2.33=反应液的总体积(ml)

6.22=NADH毫摩尔吸光度

换算公式：丙酮酸(mg/dl)=丙酮酸(mmol/L)×8.8

自动分析仪计算公式：

血清、血浆、尿液、脑脊液丙酮酸(mmol/L)={(ΔA u /min)/(ΔA s /min)}×0.5

组织丙酮酸(mmol/g)={(ΔA u /min)/(ΔA s /min)}×{(0.5/待测样品蛋白浓度(g/L)}

参考区间： 

空腹静脉、动脉血       <0.1mmol/L

注意事项 ：

1. 本法适用于自动分析仪，分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓度。如果采用自动分析仪，该120T试剂盒可检测约100次。

2. 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。

3. 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。

4. 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。