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产品基本说明：
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丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。 |
丙酮酸（PA）含量检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA1064
产品规格：100管/96样
产品说明：
丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。
技术指标：
Γ低检出限：0.1510 μg/mL
线性范围：0.78125-50 μg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体5mL×1瓶，4℃避光保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
标准品：液体1mL×1支，4℃保存。
溶液的配制： 标准液：丙酮酸钠，1mg/mL。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
3. 血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2. 标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0μg/mL。
3. 在微量石英比色皿或96孔板中加入75μL样本和25μL试剂一，混匀，静置2min，加入125μL试剂二，混匀，于520nm波长处测定管吸光值A。
三、丙酮酸含量计算：
1. 根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；x为丙酮酸钠含量（μg/mL），y为吸光值。
2. 按照血清（浆）体积计算
丙酮酸含量（μg/mL）= (x×V1)÷[V1÷(V2+V3)×V3]=11x
3. 按照样本蛋白浓度计算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr
4. 按照样本质量计算
丙酮酸含量（μg/g 质量）= (x×V1)÷(W×V1÷V2)=x÷W
5. 按照细菌或细胞数量计算
丙酮酸含量（μg/104cell）=(x×V1)÷(500×V1÷V2)= x÷500
V1：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V2：加入提取液体积，1mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。+
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
产品介绍：
