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产品基本说明：
| 氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙 二醛（MDA）。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。 |
丙二醛（MDA）含量检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA1065
产品规格：50管/48样
产品说明：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙 二醛（MDA）。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）缩合，生成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其Γ大吸收波长在532nm。进行比色后可估测样本中过氧化脂质的含量。 但是测定动植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中Γ主要的是可溶性糖，其与TBA显色反应产物的Γ大吸 收波长在450nm，但532nm处也有吸收。所以同时测定600nm、532nm、450nm下的吸光度，利用532nm与450nm、 600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
由于植物中受蔗糖干扰较大，动物中受葡萄糖干扰较大，所以本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的两个公式。若所测样本为油脂类物质，则两个公式均可。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液50mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 4℃ |
试剂二 | 粉剂×2瓶 | 4℃ |
试剂三 | 液体10mL×1瓶 | 4℃ |
溶液的配制：
1. MDA检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，溶解混匀，4℃保存待用。MDA检测工作液较难溶解，可以70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌、细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样本的制备：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，蒸馏水调零。
2. 按下表步骤加样：
试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 |
MDA 检测工作液 | 600 | 600 |
蒸馏水 | - | 200 |
样本 | 200 | - |
试剂三 | 200 | 200 |
混合液在100℃水浴中保温60min后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温，离心10min。 取上清至1mL玻璃比色皿中，测定各样本在450nm、532nm和600nm处的吸光度，分别计算ΔA450=A450测定-A450空白，ΔA532=A532测定-A532空白，ΔA600=A600测定-A600空白。（空白管只需做1-2次）
三、MDA含量计算
1. 细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/mg prot）=(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)×V 总÷(Cpr×V样本)
=5×(6.45 ×(ΔA532-A600)-1.29×ΔA450)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
MDA含量（nmol/g质量）=(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-1.29×A450)×V 总÷(W×V样本÷V提取)
=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
MDA含量（nmol/104 cell）=(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)×V总÷(500×V样本÷V提取)
=0.01×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-1.29×A450)
（4）按照血清（浆）体积计算
MDA含量（nmol/mL）=(6.45×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)×V总÷V样本
=5×(6.45×(ΔA532 -ΔA600)-1.29×ΔA450)
V总：反应体系总体积，1mL；V样本：加入样本体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；V提取：提取液体积，1mL。
2. 植物组织中MDA含量计算
（1）按照样本质量计算
MDA含量（nmol/g 质量）=(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-0.56×ΔA450)×V总÷(W×V样本÷V提取)
=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-0.56×ΔA450)÷W
（2）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/mg prot）=(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-0.56×ΔA450)×V总÷(Cpr×V样本）
=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)-0.56×ΔA450)÷Cpr
V总：反应体系总体积，1mL；V样本：加入样本体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL。
注意事项：
若发现检测样本吸光值过低，可以将沸水浴时间60min调整为90min或者更长，但同一实验中的MDA的检测都需要延长到同一时间以免引起误差。
产品介绍：
