SAINT-BIO/尚宝生物 BA1558 丙二醛（MDA）检测试剂盒（TBA比色法）

丙二醛（MDA）检测试剂盒（TBA比色法）

产品货号：BA1558

产品规格：50T/100T

产品简介：

动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA在内的复杂化合物，此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。

尚宝生物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测，丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在535nm处有Γ大吸收，据此可以通过比色法进行检测。另外MDA-TBA加合物也可以在535nm被激发产生Γ大发射波长553nm，据此也可以进行荧光检测。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成

自备材料：

1. 生理盐水或PBS

2. 离心机、离心管、96孔板

3. 酶标仪或分光光度计

4. 水浴锅或恒温箱

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 准备样品：

①血清、血浆、尿液、脑脊液样品：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水或PBS稀释后检测。

②组织、细胞等样品：组织或细胞可以使用PBS或RAPI裂解液等进行匀浆或裂解，匀浆或裂解组织时组织重量占匀浆液或裂解液的比例应为10%；对于细胞，每10⁶个细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，4℃8000~12000g离心10min，取上清用于后续测定。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作，样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。

③本试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表：

2. 配制TBA工作液：称取适量TBA，用TBA稀释液配制成浓度为0.68％的TBA工作液。例如取68mg TBA用10ml TBA稀释液配制，Γ终浓度即为0.68%的TBA工作液，TBA工作液需完全溶解后再使用，可以加热到60℃促溶，并可通过反复剧烈Vortex促溶。配制好的TBA工作液4℃避光保存，至少1个月内有效。

3. 稀释系列标准品：取适量MDA标准品(1mmol/L)，用恰当溶液稀释至1、2、5、10、20μM(如果进行简易快速检测，标准品直接稀释10μM)。注意：待测样品为血清、血浆时，标准品宜用生理盐水稀释；待测样品由匀浆液、裂解液、PBS获得时，标准品宜用相同溶液稀释。其原则是保证空白管、标准管、测定管具有可比性。配制好的MDA标准品4℃避光保存，至少3个月内有效。

4. 配制MDA检测工作液：临检测前，根据待测定的样品数(含对照)，参考下表新鲜配制适量的MDA检测工作液。

5. MDA加样: 在离心管或其它适当容器内加入0.08ml适当溶液作为空白对照(注意：待测样品为血清、血浆时，标准品宜用生理盐水稀释；待测样品由匀浆液、裂解液、PBS获得时，标准品宜用相同溶液稀释，其原则是保证空白管、标准管、测定管具有可比性)。加入0.08ml上述不同浓度标准品用于制作标准曲线(如果进行简易快速检测，直接加入浓度为10μM的标准品)，加入0.08ml样品用于测定；随后加入3ml MDA检测工作液。可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：

混匀, 加盖，95℃水浴煮沸40min，加热时务必注意避免液体暴沸溅出；如果使用加热块(Heat block)进行加热注意用重物压紧离心管盖；如果使用沸水浴，则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管，或用Parafilm封住离心管口，用针头刺一小孔；Γ方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热金属浴。

6. MDA测定：水浴或流水冷却至室温，3000r/min离心15min或4000gr/min离心10min。取上清，其颜色为黄色至棕红色，蒸馏水调零，比色杯光径为1cm，分光光度计测定535nm处空白管、标准管、测定管的吸光度，如果不方便也可以测定530~540nm之间的吸光度，分别记为A_空白、A_标准、A_测定。

计算：

如果进行简易快速检测，直接以10μM标准品进行计算，获得MDA的摩尔浓度；如果需要精确计算，以MDA 标准品浓度为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据标准曲线计算处MDA提取液的浓度；对于固体状组织，可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示Γ初样品中的MDA含量，例如μmol/g蛋白或组织。

简易快速血清、血浆、尿液等液体样品中MDA含量计算公式：

MDA浓度(μmol/L)=(A_测定-A_空白)/(A_标准-A_空白)×10

简易快速细胞、组织样品中MDA含量计算公式：

MDA浓度(μmol/g)=(A_测定-A_空白)/(A_标准-A_空白)×10/蛋白质浓度(mg/ml)

式中：A_测定=测定孔的吸光度

A_标准=标准孔的吸光度

A_空白=空白孔的吸光度

参考区间：  健康成年人血清MDA：9.58±2.15μmol/L

健康成年人血浆MDA：7.31±1.27μmol/L

注意事项 ：

1. 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2. 参考取样量：血清、血浆、尿液取0.1ml；低密度脂蛋白悬液取0.1~0.2ml；食用油取0.03ml；肝脏、心肌、肌肉等，取5%或10%匀浆0.1~0.2ml。

3. 测定样品吸光度值较低时，可将水浴延长至80min，但应同时延长，以免造成批间差异。

4. 待测样本如不能及时测定，应置于-20℃保存，4天内稳定。

5. 避免使用EDTA、枸橼酸、氟化钠、草酸等抗凝剂。

有效期：12个月有效。4℃运输，-20℃保存。