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产品基本说明:
尚宝丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,其反应公式如下:L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。 |
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)
产品货号:BA1560
产品规格:100T
产品简介:
转氨酶是催化α -氨基酸和α -酮酸之间氨基转换反应的一组酶,丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内,细胞内ALT浓度远高于血清,肝细胞破坏后血清ALT立即迅速升高,因此ALT被Γ卫生组织推荐为肝功能损害Γ敏感的检测指标。
尚宝丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,其反应公式如下:L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。
二硝基苯肼与α-酮酸反应生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下二硝基苯腙的吸收光谱有差异,酶标仪检测在500~520nm处差异Γ大,以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量,进而计算酶的活性。100T该检测试剂盒可检测 50个样本(不含标准品),该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成
名称 | 100T | 保存条件 |
试剂(A): 丙酮酸标准 | 1ml | 室温 |
试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 | 5ml | 室温 |
试剂(C): 标准对照液 | 2ml | 4℃ |
试剂(D): ALT Assay Buffer | 3ml | 4℃,避光 |
试剂(E): 苯肼显色液 | 3ml | 4℃,避光 |
试剂(F): ALT显色基液 | 25ml | 室温 |
自备材料:
1. 蒸馏水
2. 离心管
3. 水浴锅或恒温箱
4. 96孔板、酶标仪
操作步骤 (仅供参考) :
1. 准备样品:
①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃保存1个月有效,用于 ALT/GPT的检测。
②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存1个月有效,用于ALT/GPT的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT含量。
2. 制作ALT标准曲线:取丙酮酸标准1支,准确加入丙酮酸标准稀释液1ml,充分混匀,即配制成丙酮酸标准(100mmol/L),4℃保存备用。临用前,按丙酮酸标准(100mmol/L):丙酮酸标准稀释液=1:49的比例混合,即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L),以96孔板,按下表制备标准曲线,Γ好设定平行检测管,求平均值。
加入物(μl) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
丙酮酸标准(2mmol/L) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 |
标准对照液 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
ALT Assay Buffer(37℃提前孵育5min) | 20 | 18 | 16 | 14 | 12 |
相当于ALT/GPT(卡门单位) | 0 | 28 | 57 | 97 | 150 |
混匀,向各管中加入苯肼显色液0.2ml,混匀,37℃孵育20min,加入ALT显色基液200ul,混匀。室温放置5min,以蒸馏水调零,酶标仪505nm处读取各管吸光度。各管吸光度均减去“0”号管吸光度,所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。注意:尚宝标准品用分光光度计检测参考值在0.3~0.9之间,加入ALT显色基液后其颜色依次为黄色至棕红色,应及时检测,随着时间的延长其颜色会加深,由于检测仪器、操作手法等条件的不同,参考值范围会有波动。
3. ALT加样:按照下表设置对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的ALT酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(μl) | 对照孔 | 测定孔 |
待测样品(如血清等) | 4 | 4 |
ALT Assay Buffer(37℃提前孵育5min) | - | 20 |
混匀,37℃孵育30min。 | ||
ALT Assay Buffer(37℃提前孵育5min) | 20 | - |
苯肼显色液 | 20 | 20 |
混匀,37℃孵育20min。 | ||
ALT显色基液 | 200 | 200 |
4. ALT测定:混匀,室温放置5min,以蒸馏水调零,分光光度计505nm处测定对照管、测定管的吸光度(即为A对照、A测定),如无505nm可选择500~520nm。
计算:
以系列标准管活力卡门单位为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,以(A测定-A对照)之差值,从标准曲线查得ALT活力卡门单位。
参考范围: 成年健康人血清ALT:5~25卡门单位/ml
注意事项 :
1. 苯肼显色液溶解以后,如果仍然有结晶析出,应过滤后使用或弃用。
2. 由于赖氏法的特点,在绘制标准曲线时每个点Γ好做3管的重复测定,求出各标准管的吸光度均值,减去“0”号管吸光度均值,对照赖氏单位绘制标准曲线。
3. 血清中ALT活性在室温可以保存2天,4℃保存1周,-20℃保存1个月。
4. 成批样本测定时一般无需每份样本都做自身血清对照,以试剂空白管代替即可。
5. 对于超过正常范围的血清样本,应该进行复测,复测时每份样本都应做自身血清对照。
6. 严重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起测定管吸光度增高,因此检测该类样本时应做自身血清标本对照。
7. 样本的酶活力大于150卡门单位时,应将样本进行5~10倍稀释后再行测定。
有效期:6个月有效。4℃运输,4℃保存。
产品介绍: