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产品基本说明：
| 氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。 |
丙二醛(MDA)含量检测试剂盒（微量法）
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA1066
产品规格：100管/96样
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；
MDA检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，溶解混匀，4℃保存待用。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存；
注意事项：MDA检测工作液较难溶解，可以70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解。或者通过超声处理以促进溶解。
产品说明：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2，4-二酮），其Γ大吸收波长在532nm。进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中Γ主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的Γ大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。所以同时测定600nm、532nm、450nm下的吸光度，利用532nm与450nm、600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
由于植物中受蔗糖干扰较大，动物中受葡萄糖干扰较大，所以本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的两个公式。若所测样品为油脂类物质，则两个公式均可。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、MDA提取：
1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样品的制备：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定操作：
1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，蒸馏水调零。
2、按下表步骤加样：
试剂名称 | 测定管 |
MDA检测工作液（μL） | 300 |
样本（μL） | 100 |
试剂三（μL） | 100 |
混合液在100℃水浴中保温30min后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温，离心10min。吸取200uL上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定各样品在450nm、532nm和600nm处的吸光度。
三、MDA含量计算：
a. 按96孔板计算
1、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）×V总÷（Cpr×V样本）
=5×（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）÷Cpr
（2）按照样品质量计算
MDA 含量（nmol/ g 鲜重）=（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）×V总÷（W×V样本÷V提取）
=5×（12.9×（A532 -A600）-2.58×A450）÷W
(3) 按照细菌或细胞密度计算：
MDA 含量（nmol/104 cell）=（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）×V总÷（400÷V提取×V样本）
=0.125×（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）
V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。 W：样品质量，g；400：细胞或细菌总数，400万；V提取：提取液体积，1mL。
2、植物组织中MDA含量计算
（1）按照样品质量计算
MDA含量（nmol/ g鲜重）=（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）×V总÷（W×V样本÷V提取）
=5×（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）÷W
（2）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）×V总÷（Cpr×V样本）
=5×（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）÷Cpr
V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。
b. 按微量比色皿计算
1、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）×V总÷（Cpr×V样本）
=5×（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）÷Cpr
（2）按照样品质量计算
MDA含量（nmol/ g鲜重）=（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）×V总÷（W×V样本÷V提取）
=5×（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）÷W
(3) 按照细菌或细胞密度计算：
MDA 含量（nmol/104 cell）=（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）×V 总÷（400×V样本÷V提取）
=0.0125×（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）
V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g；400：细胞或细菌总数，400万；V提取：提取液体积，1mL。
2、植物组织中MDA含量计算
（1）按照样品质量计算
MDA含量（nmol/ g鲜重）=（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）×V总÷（W×V样本÷V提取）
=5×（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）÷W
（2）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）×V总÷（Cpr×V样本）
=5×（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）÷Cpr
V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。
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