同商品型号列表:
产品基本说明:
丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。 |
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒(可见分光光度法)
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号:BA1063
产品规格:50管/48样
产品简介:
丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。
产品内容:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体9mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:液体50mL×1瓶, 4℃保存;
丙酮酸钠标准液,1mg/mL:液体1mL×1瓶, 4℃保存。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、丙酮酸提取:
1、 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):
提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建500万细菌或细胞加1mL提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次),静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
2、 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
3、 血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
4、 标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0g/ml。
二、测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
2、 取300μL标准品或样本+100μL试剂一于1.5mLEP管中,混匀,静置2min,加入500μL试剂二,混匀,于520nm波长处测定吸光值A。
三、丙酮酸含量计算:
1、 根据标准品浓度和测定值建立标准曲线;y为丙酮酸钠含量(μg/mL),x为吸光值。
2、 按照血清(浆)体积计算
丙酮酸含量(μg/mL)= (y×V1)÷(V3×V1÷V2)=y×10
3、 按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量(μg/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr
4、 按照样品质量计算
丙酮酸含量(μg/g 鲜重)= (y×V1)÷(W ×V1÷V2)=y÷W
5、 按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量(μg/104 cell)=(y×V1)÷(500×V1÷V2)= y÷500
V1:加入反应体系中样本体积,0.3mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
产品介绍: