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产品基本说明：
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生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。 超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据A530值可以计算样品中O2－含量。 |
超氧阴离子(OFR)含量检测试剂盒（可见分光光度法）
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA1071
产品规格：50管/48样
产品简介：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据A530值可以计算样品中O2－含量。
产品内容：
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体32mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：氯仿，自备。
亚硝酸钠标准品：液体1mL×1支，4℃保存。10µmol/mL亚硝酸钠。
需自备的仪器和用品：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：
一、超氧阴离子提取
1、植物、动物组织：称取约0.1g样本，加入提取液1mL，充分研磨，12000rpm，4℃，离心20min，取20µL上清测定蛋白含量，其余上清作为待测样本。
2、血清或培养液：直接测定。
二、测定操作表
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
2、标准溶液的制备
取适量亚硝酸钠标准液，首先16倍稀释至0.625µmol/mL，然后进行倍比稀释至 0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.0049、0.00244、0.0012、0.0006µmol/mL 梯度稀释的标准溶液，用 0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.00244、0.0006µmol/mL 标准管做标准曲线。
3、操作表
试剂名称（mL） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
标准溶液 | 0.2 | ||
样本 | 0.2 | ||
提取液 | 0.5 | 0.3 | 0.3 |
试剂一 | 0.4 | 0.4 | 0.4 |
充分混匀，37℃反应20min | |||
试剂二 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
试剂三 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
混匀，37℃水浴20min | |||
试剂四 | 100 | 100 | 100 |
混匀，8000rpm，25℃，离心5min，小心吸取上层水相1mL，蒸馏水调零，1mL玻璃比色皿，测定A530。计算∆A标准=A标准管-A空白管，∆A样品=A测 定管-A空白管。每次实验空白管仅需做一管。 | |||
三、超氧阴离子含量计算公式
1、标准曲线的绘制
以∆A标准为y轴，标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线y=kx+b。
2、超氧阴离子含量的计算
将∆A样品带入方程得到x值（µmol/mL）
（1）按照样本鲜重计算
超氧阴离子含量（µmol/g 鲜重）= 2x×V样本÷（V样本÷V提取×W）=2x÷W。
超氧阴离子产生速率（µmol/ min/ g 鲜重）= 2x×V样本÷（V样本÷V提取×W）÷T=0.1x÷W。
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（µmol/mg prot）=2x×V样本÷（V样本×Cpr）=2x÷Cpr。
超氧阴离子产生速率（µmol/ min/mg prot）= 2x×V样本÷（V样本×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr。
（3）按照血清或培养液体积计算
超氧阴离子含量（µmol/mL）=2 x
超氧阴离子产生速率（µmol/min/mL）=2x÷T=0.1x。
V样本：参与反应样本体积，0.2mL；V提取：提取过程中加入的提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品鲜重，g；T：反应时间，20min。
注意事项：
1、OD值大于1.0，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、样品制备好后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
产品介绍：
