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产品基本说明：
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生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。 超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-，NO2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据A530值可以计算样本中O2-含量。 |
超氧阴离子含量检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA1072
产品规格：100管/96样
产品简介：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-，NO2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据A530值可以计算样本中O2-含量。
技术指标：
Γ低检出限：0.001451μmol/mL
线性范围：0.0019-0.5μmol/mL。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体110mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 液体12mL×1瓶 | 4℃ |
试剂二 | 液体8mL×1瓶 | 4℃ |
试剂三 | 液体8mL×1瓶 | 4℃ |
试剂四 | 液体14mL×1瓶（自备） | 4℃ |
标准品 | 液体0.5mL×1支 | 4℃ |
溶液的配制：
1. 试剂四：自备氯仿；
2. 标准品：10μmol/mL亚硝酸钠。
需自备的仪器和用品：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
操作步骤 (仅供参考) ：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 植物、动物组织：称取约0.1g样本，加入提取液1mL，充分研磨，12000rpm，4℃，离心20min，取20μL上清测定蛋白含量，其余上清作为待测样本。
2. 血清或培养液：直接测定。
二、测定步骤：
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备
取适量亚硝酸钠标准液，将其稀释为0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125μmol/mL的标准溶液，用这些标准管做标准曲线。
3. 操作表
空白管 | 测定管 | 标准管 | |
标准溶液（μL） | 40 | ||
样本（μL） | 40 | ||
提取液（μL） | 100 | 60 | 60 |
试剂一（μL） | 80 | 80 | 80 |
混匀，37℃水浴20min | |||
试剂二（μL） | 60 | 60 | 60 |
试剂三（μL） | 60 | 60 | 60 |
混匀，37℃水浴20min | |||
试剂四（μL） | 100 | 100 | 100 |
混匀，8000rpm，25℃，离心5min，小心吸取上层水相200μL，蒸馏水调零，微量玻璃比色皿/96孔板，测定530nm处吸光值，计算∆A标准=A标准管-A空白管，∆A样本=A测定管-A空白管。（空白管只需做1-2次） | |||
三、超氧阴离子含量计算公式：
1. 标准曲线的绘制：以∆A标准为y轴，标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线y=kx+b。
2. 超氧阴离子含量的计算：将∆A样本带入方程得到x值（μmol/mL）。
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（μmol/g质量）=2x×V样本÷（V样本÷V提取×W）=2x÷W
超氧阴离子产生速率（μmol/min/g质量）=2x×V样本÷（V样本÷V提取×W）÷T=0.1x÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）=2x×V样本÷（V样本×Cpr）=2x÷Cpr
超氧阴离子产生速率（μmol/min/mg prot）=2x×V样本÷（V样本×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr
（3）按照血清或培养液体积计算
超氧阴离子含量（μmol/mL）=2x
超氧阴离子产生速率（μmol/min/mL）=2x÷T=0.1x
V样本：参与反应样本体积，0.04mL；V提取：提取过程中加入的提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，20min。
注意事项：
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 样本制备好后，立刻进行测定，请勿将样本进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3. 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
产品介绍：
