SAINT-BIO/尚宝生物 BA1849 超高效感受态细胞制备试剂盒

 超高效感受态细胞制备试剂盒

产品货号：BA1849

产品规格：100ul×100

产品介绍：

Speed E.coli Transformation Kit是尚宝生物科技有限公司研发可实现快速转化的感受态细胞制备试剂盒，适用于实验室多种菌株，特别是DH5α, JM109, DH10B, XL1-Blue等。特殊的感受态试剂配方，使转化效率可达到10⁸-5×10⁹cfu/ug pUC19 DNA, 转化整个过程不需冰浴、热激和孵育等步骤，Γ快30秒即可实现完美的转化。

产品特色：

1. 转化快：Γ快可30快速转化，不需冰浴、热激和孵育步骤

2. 效率高：达到10⁸-5×10⁹cfu/ug pUC19 DNA

3. 稳定性好：-70℃冰箱可保存一年时间

4. 安全性高：不需液氮处理，直接超低温冻存即可

操作步骤(仅供参考):

以50ml的E.coli培养体积为例

感受态细胞制备操作步骤

1. 将0.5ml新鲜过夜培养的E.coli菌接种于50ml SOB培养基中（1:100 比例接种），在摇床中以25℃，250 rpm条件下振荡培养，直至OD600nm达到0.4-0.6。

★注意: 在25℃，250 rpm振荡培养可提高感受态细胞的效率；制备感受态的E.coli菌株应处于生长的对数期，即OD_600nm达到0.4-0.6，大于0.6时的细菌状态变差，小于0.4时细菌量较少，均不适合制备感受态细胞。

2. 将Γ步中的E.coli培养基转移至冰上，冰浴10分钟预冷细菌。然后在4℃条件下，3000rpm离心10分钟。

★注意：制备感受态细胞时所有步骤都要在低温条件下进行，操作时动作要轻柔，不可剧烈地处理E.coli菌体。

3. 弃去离心后的上清，加入15ml E.coli Competent Buffer, 轻柔地重悬细菌沉淀；重复实验步骤2的操作。

4. 彻底地弃去上清，加入5ml E.coli Competent Buffer，轻柔地重悬细菌沉淀。

5. 在冰上以100ul或200ul的体积分装E.coli的悬浮液，直接冻存感受态细胞至-70℃超低温冰箱中（勿用液氮处理感受态细胞）。

转化步骤

多种转化形式可选：30秒极速转化；5分钟快速转化；常规转化。

注意事项：

1. E.coli菌株影响感受态效率

不同的菌株制备的感受效率差异不同，像DH5α,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold, TG1等菌株，使用 Speed E.coli Transformation Kit 制备的感受态效率较高。

2. 菌株培养条件

菌株培养时，用营养更丰富的SOB培养基；在25℃，250rpm振荡培养，会使E.coli 菌处于Γ佳生长状态，更适宜用于制备感受态细胞

3. 预热平板可提高转化效率

在转化前，将4℃保存的平板转移到 37℃培养箱中预热一段时间，可提高转化时的效率。

4. 转化时加入SOC培养基 

在做转化实验时，加入营养丰富的SOC培养基至DNA-感受态转化混合液中，增强感受态细胞的生长及吸收 DNA的能力。

保存条件：低温运输，4℃保存，有效期12月。

附录：

SOB培养基配制

1. 组份浓度：2%（W/V）Tryptone ；0.5%（W/V）Yeast Extract；0.05%（W/V）NaCl；2.5 mM KCl；10 mM MgCl2

2. 配制方法：

① 配制250 mM KCl溶解：在90ml的去离子水中溶解1.86g KCl 后，定容至100ml。

② 配制2 M MgCl2溶液：在90ml去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100ml，高温高压灭菌。

③ 称取下列试剂，置于1L烧杯中：Tryptone 20g；Yeast Extract 5g；NaCl 0.5g。

④ 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

⑤ 量取10ml 250mM KCl溶解，加入到烧杯中。

⑥ 滴加5N NaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0。

⑦ 加去离子水将培养基定容至1L。

SOC培养基配制

1. 配制1M葡萄糖溶液：在90ml去离子水中溶解18g葡萄糖，充分溶解后定容至100ml, 用0.22um滤器过滤除菌。

2. 向100ml SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2ml, 均匀混合。