SAINT-BIO/尚宝生物 BA2002 DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒

DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒

产品货号: BA2002

产品规格: 50T/100T

产品简介：

本试剂盒采用可以高效、专一结合的DNA硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100bp-10kb大小的片段，回收率大于80%（小于100bp和大于100kb的DNA片段回收率为30-50%）。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。

注意事项：在使用本试剂盒前请阅读此注意事项。

1. 电泳前Γ好更换成新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

2. 如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。

3. 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

4. 回收小于100bp和大于100kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。

5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。

6. 如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤（仅供参考）：（使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。）

1. 琼脂糖凝胶电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管中，称取重量。

2. 向胶块中加入3倍体积溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul,则加入300ul溶胶液），50-55℃水浴放置 10min，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。

注意：溶胶时，如果溶胶液变为红色（正常情况下为淡黄色），可向含有DNA的胶溶液中加入10-30ul 3M醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响DNA与吸附柱的结合，影响回收效率。

3. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

注意：胶块完全溶解后Γ好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。

4. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

5. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6. 12000rpm离心2min，尽量除去漂洗液。将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，防止漂洗液中的乙醇影响后续的实验。

7. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加适量经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心1min。

注意：

1) 为了增加回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，12000rpm再次离心1min。

2) 洗脱缓冲液体积不应少于30ul，体积过小影响回收效率。

3) 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。

8. DNA产物-20℃保存。

保存条件：

常温干燥保存，复检期为一年。