SAINT-BIO/尚宝生物 BA1990 动物组织基因组DNA提取试剂盒（磁珠法）

动物组织基因组DNA提取试剂盒（磁珠法）

产品货号：BA1990

产品规格：50T/100T

产品介绍:

试剂盒采用磁珠法来提取小鼠不同组织的基因组DNA，磁珠与DNA的特异性结合使得提取的DNA纯度高、 浓度大，而且操作时间短，不需要使用其他仪器。使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规的分子生物学实验，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。本试剂盒无需使用苯、氯仿等有毒试剂，操作安全。

产品组成：

注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

实验步骤（仅供参考）：

1. 称取小鼠组织23-26mg放于1.5mL离心管中，在离心管中加入200μL溶液A，然后用研磨杵将组织研磨完全。

2. 向离心管中加入20μL的蛋白酶K溶液（20mg/mL），充分震荡混匀，65℃放置1-3h，取出后向离心管中加入20μL RNase A（10mg/ mL），吹吸混匀后室温放置20min。

3. 向离心管中加入220μL无水乙醇和15μL羟基磁珠（磁珠使用前需涡旋震荡混匀），涡旋震荡混匀后室温放置10min，每隔2-3min颠倒混匀一次。

4. 将离心管放于磁力架上吸附5min，待磁珠聚集后将液体吸出。

5. 向离心管中加入600μL漂洗液（使用前请确认是否已加入无水乙醇），涡旋震荡混匀后放于立即磁力架上吸附，待磁珠聚集液体澄清后将液体吸出。

6. 重复操作步骤5两次。

7. 将离心管置于磁力架上开盖放置5min，以除去多余的乙醇，静置期间如果离心管底部有多余的液体，用移液枪将其吸出。

8. 将离心管从磁力架上取下，置于普通离心管架上，向离心管中加入100-200μL洗脱液，用移液枪将磁珠与洗脱液吹吸混匀，65℃放置5min，之后放于磁力架上吸附，待磁珠聚集液体澄清后将液体吸到干净的离心管中（若吸取的液体出现浑浊，可以进行离心），该液体即为提取的基因组DNA，提取的DNA产物应保存在-20℃。

注意事项： 

1. 磁珠置于2-8℃冰箱保存。冷冻，干燥和离心等操作会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并影响磁珠表面功能基团的化学活性。

2. 尽量使用新鲜的小鼠组织进行基因组DNA的提取。

3. 在提取小鼠脾的基因组DNA时，加入洗脱液温浴后会变粘稠，可适当增加（如再向离心管中加入100μL的洗脱液）洗脱液的体积进行离心。

4. 洗脱液的体积不应少于100μL，体积过少会影响提取效率，而且洗脱液的pH值也会影响洗脱效率，如果需要用水洗脱，应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

5. DNA浓度及纯度检测：提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度，DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

保存：2-8℃（注：RNase A和蛋白酶K以附件形式，低温运输，到货后-20℃保存。）