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产品基本说明:
淀粉酶(Amylase,AMS)又称1,4-α-D-葡聚糖水解酶,是水解淀粉和糖原的酶类总称,淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法,前者的方法有碘-淀粉法,后者有以麦戊糖底物的方法,以4-NP-G为底物的方法。 |
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉微板法)
产品货号:BA1577
产品规格:200T/500T
产品简介:
淀粉酶(Amylase,AMS)又称1,4-α-D-葡聚糖水解酶,是水解淀粉和糖原的酶类总称,淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法,前者的方法有碘-淀粉法,后者有以麦戊糖底物的方法,以4-NP-G为底物的方法。
尚宝生物 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉微板法)其检测原理是血清或血浆等样品中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等,碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物,其蓝色深浅与未经酶促反应的空白比较,可计算出淀粉酶的活力单位,通过分光光度计检测660nm处吸光度,可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。本法操作简单、易行,不需要特殊设备、试剂价廉,是我国目前应用较为广泛的方法。如果采用酶标仪100T可以检测约1300次。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
名称 | 200T | 500T | 保存条件 |
试剂(A): AMS Assay buffer | 8ml | 20ml | 2-8℃ |
试剂(B): KI Solution | 0.8ml | 2ml | 2-8℃,避光 |
自备材料:
1. 96孔板
2. 生理盐水、蒸馏水
3. 酶标仪
操作步骤 (仅供参考) :
1. KI工作液:取出KI Solution恢复至室温,按KI Solution:蒸馏水=1:9的比例混匀,即为KI工作液,4℃避光可保存1个月。
2. 准备样品:
①细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-20℃冻存,用于AMS的检测。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水5~10倍稀释后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常用生理盐水10~20倍稀释后直接用于测定,-20℃冻存,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了样品但不加底物的对照。
③高活性样品:如果样品中含有较高活性的AMS,可使用生理盐水或PBS等进行稀释。
④样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度(mg/ml),以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AMS含量。
3. AMS加样:取96孔板,按照下表设置空白孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的淀粉酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测Γ好能设置平行孔。
加入物(μl) | 测定孔 | 空白孔 |
AMS Assay buffer | 35 | 35 |
37℃孵育5min。 | ||
待测样品 | 7 | - |
混匀,置于 37℃水浴,准确孵育 7.5min。 | ||
KI工作液 | 35 | 35 |
蒸馏水 | 210 | 217 |
4. AMS测定:轻轻混匀,蒸馏水调零,酶标仪测定660nm处吸光度(记为A测定和A空白)。
计算结果:
淀粉酶活性单位的定义:100ml血清中的淀粉酶,在37℃15min水解5mg淀粉定义为一个酶活力单位,根据酶活性定义,计算出样品中的AMS活性。
血浆、血清和尿液液体样品AMS活力(U/dl)
=(A空白-A测定)/A空白×(0.4×0.035×15×100)/(5×7.5×0.007)×稀释倍数
=(A空白-A测定)/A空白×80×稀释倍数
细胞或组织样品AMS活力(U/ mg)
=(A空白-A测定)/A空白×(0.4×0.035×15)/(5×7.5×0.007×待测样品蛋白浓度)
=(A空白-A测定)/A空白×0.8/待测样品蛋白浓度
式中:A空白 =空白管的吸光度
A测定 =测定管的吸光度
0.4= AMS Assay buffer中淀粉浓度mg/ml
参考区间:(37℃,健康人):血清淀粉酶活性:80~180U/dl
尿液淀粉酶活性:100~1200U/dl
注意事项:
1. 本试剂盒亦可用分光光度计进行检测,但检测的样品数相应急剧减少。
2. 草酸盐、枸橼酸盐、EDTA二钠及氟化钠对AMS活性有抑制作用,肝素没有。待测样品中不能含有AMS抑制剂,同时需避免反复冻融。
3. 酶活性在400U以下时与底物的水解量呈线性关系,如测定孔的吸光度比空白管的吸光度小1倍时,应加大样品稀释倍数或减少加入待测样品的量,重新测定,测定结果应乘以稀释倍数。
4. 本试剂盒亦适用于其他样品的AMS测定,尿液检测应先作10~20倍稀释后测定。
5. AMS Assay buffer如果出现浑浊或絮状物,应弃用。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6个月有效。常温运输,4℃保存。
产品介绍: