SAINT-BIO/尚宝生物 BA1086 多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒（微量法）

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒（微量法）

产品货号：BA1086

产品规格：100管/48样

产品说明：

PPO（EC1.10.3.1）是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌，后者在410nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

产品内容： 

溶液的配制：

1. 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

需自备的仪器和用品： 

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰 和蒸馏水。

操作步骤： 

一、样本处理理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2. 称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）

充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

注意：每个测定管需要设置一个对照管，可以在不同对照管中加入不同样本的粗酶液，然后集中进行5min沸水浴处理。

三、PPO活性计算 

a. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

PPO（U/mg prot）= ΔA÷0.01×V反总÷（Cpr×V样）÷T =60×ΔA÷Cpr

（2）按样本质量计算：

单位的定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

PPO（U/g质量）=ΔA÷0.01×V反总÷（W÷V样总×V样）÷T =60×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 PPO（U/10⁴cell）=ΔA÷0.01×V反总÷（500÷V样总×V样）÷T =0.12×ΔA

b. 用96孔板测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。

PPO（U/mg prot）=ΔA÷0.005×V反总÷（Cpr×V样）÷T =120×ΔA÷Cpr

（2）按样本质量计算：

单位的定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。

PPO（U/g质量）=ΔA÷0.005×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T =120×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。 PPO（U/10⁴cell）=ΔA÷0.005×V反总÷（500÷V样总×V样）÷T =0.24×ΔA

V反总：反应体系总体积，0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积， 1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞数量，500万；T：反应时间，10min。

注意事项：

不同样本的多酚氧化酶Γ佳的反应温度略有差别，可在 25-37℃之间进行调节。