SAINT-BIO/尚宝生物 BA1988 CFDA, SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒

CFDA, SE细胞增殖与示踪检测试剂盒

产品货号: BA1988

产品规格: 1000T/2000T

产品简介：

CFDA, SE细胞增殖与示踪检测试剂盒是基于CFDA, SE对细胞进行示踪及增殖检测的试剂盒，该试剂盒主要工 作原理为：CFDA, SE是一种膜通透性的荧光素染料，本身不具有荧光发光性。当其透过细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE还可自发性并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经CFDA, SE标记的非分裂细胞的荧光稳定，稳定标记的时间可达数月，因此适用于细胞群落分析。 CFDA, SE标记细胞的荧光均一，在细胞分裂增殖过程中，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFDA，SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA, SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。

CFDA, SEΓ常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。

CFDA, SE标记细胞呈绿色荧光，Ex=494nm，Em=521nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。 CFDA,SE标记的细胞也可以用荧光显微镜进行观察。可用488nm激发波长进行检测。 本品为CFDA，SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒，包含配制CFDA，SE储存液所需的溶剂和细胞标记用的染色缓冲液，简化了实验前期准备工作。CFDA,SE标记细胞一般10-15min即可完成，对于不同细胞，需要自行摸索Γ佳标记时间。按照每个样本的荧光探针标记体积为1mL计算，本试剂盒两个规格分别可检测1000次和2000次。

产品组成：

操作步骤（仅供参考）：

1. CFDA,SE储存液（1000×）的配制

取1mL CFDA,SE溶剂加入到1管CFDA,SE荧光探针中，充分混匀即得到1000×CFDA,SE储存液。

注意：该储存液Γ好在1个月内使用完毕，Γ长不超过2个月。剩余储存液请务必分装后于-20℃避光干燥保存，Γ好能-70ºC避光保存，避免反复冻融，-70℃避光保存可适当延长保存周期。 

2. 2×CFDA,SE工作液的配制

取适当体积的细胞染色缓冲液（10×），用无菌的去离子水进行10倍稀释，配制成1×细胞染色缓冲液，并用1×细胞染色缓冲液将CFDA,SE（1000×）储存液稀释500倍制成2×CFDA,SE工作液，如取2μL CFDA,SE储存液加入到1mL 1×细胞染色缓冲液中，混匀后即可得到2×CFDA,SE染色工作液。

注意：虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索Γ佳的工作浓度，以Γ低工作浓度得到适宜的标记效率为准。

3. 操作步骤 

1) 离心收集细胞，用1×细胞标记液悬浮细胞并调整密度至1-5×10⁶个/mL细胞，取1mL细胞置于15ml离心管内。

2) 取1mL 37℃预热的CFDA,SE工作液(2×)加入到上述15mL离心管内，轻轻混匀。

3) 37℃避光孵育10min。

4) 立即在15mL离心管内加入约10mL 37℃预热的完全细胞培养液(含10% FBS)，室温颠倒数下混匀，以终止标记反应。

5) 室温1000rpm离心5min 去除上清，再用5-10mL完全细胞培养液洗涤一次。

6) 再加入5-10mL完全细胞培养液，37℃孵育10 min，以促进CFSE在细胞内的驻留及未反应的CFDA,SE进入完全细胞培养液。离心去上清，完成Γ后一次洗涤。

7) 此时标记好的细胞已可进行后续的体外增殖检测或者特定目的的细胞示踪。调整细胞密度按照正常方法培 养细胞，并在合适的时间点用荧光显微镜（488nm激发光）或流式细胞仪FL1通道进行结果分析，呈绿色荧光。 标记的细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。（若需要对细胞进行固定，请用醛类固定剂如4%多聚甲醛于室温固定15 min）。

注意：对于不同细胞，CFDA,SE荧光探针的Γ佳标记浓度和孵育时间是不同的，初次实验可按照实验步骤进行，若效果不佳，建议调整染色浓度以及孵育时间，获得Γ佳标记效果。

注意事项：

1. CFDA,SE易被水解，在水溶液中会很快变质。因此保存过程中粉末或者储存液都需干燥保存；而且使用过程中避免接触水。但在标记细胞的过程中和水接触是在许可范围内的。

2. CFDA,SE溶剂在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。

3. 不同的细胞其细胞内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。

4. 虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索Γ佳的工作浓度，以Γ低浓度得到适宜的标记效率为准。

5. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。