SAINT-BIO/尚宝生物 BA1576 淀粉酶（AMS）检测试剂盒（碘-淀粉比色法）

淀粉酶（AMS）检测试剂盒（碘-淀粉比色法）

产品货号：BA1576

产品规格：100T/200T

产品简介：

淀粉酶(Amylase，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称，淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G为底物的方法。

尚宝生物 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样品中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白比较，可计算出淀粉酶的活力单位，通过分光光度计检测660nm处吸光度，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。本法操作简单、易行，不需要特殊设备、试剂价廉，是我国目前应用较为广泛的方法。如果采用酶标仪100T可以检测约1300次。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 比色杯

2. 生理盐水、蒸馏水

3. 分光光度计

操作步骤 (仅供参考) ：

1. KI工作液：取出KI Solution恢复至室温，按KI Solution：蒸馏水=1:9的比例混匀，即为KI工作液，4℃避光可保存1个月。

2. 准备样品：

①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于AMS的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水5~10倍稀释后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常用生理盐水10~20倍稀释后直接用于测定，-20℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了样品但不加底物的对照。

③高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS，可使用生理盐水或PBS等进行稀释。

④样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度（mg/ml），以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AMS含量。

3. AMS加样：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的淀粉酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测Γ好能设置平行管。

4. AMS测定：轻轻混匀，蒸馏水调零，分光光度计(比色杯光径1cm)测定660nm处吸光度(记为A_测定和A_空白)。

计算结果：

淀粉酶活性单位的定义：100ml血清中的淀粉酶，在37℃15min水解5mg淀粉定义为一个酶活力单位，根据酶活性定义，计算出样品中的AMS活性。

血浆、血清和尿液液体样品AMS活力(U/dl)

=(A_空白-A_测定)/A_空白×（0.4×0.5×15×100）/（5×7.5×0.1）×稀释倍数

=(A_空白-A_测定)/A_空白×80×稀释倍数

细胞或组织样品AMS活力(U/ mg)

=(A_空白-A_测定)/A_空白×（0.4×0.5×15）/（5×7.5×0.1×待测样品蛋白浓度）

=(A_空白-A_测定)/A_空白×0.8/待测样品蛋白浓度

式中：A_空白 =空白管的吸光度

A_测定 =测定管的吸光度

0.4= AMS Assay buffer中淀粉浓度mg/ml

参考区间：（37℃，健康人）：血清淀粉酶活性：80～180U/dl

尿液淀粉酶活性：100～1200U/dl

注意事项：

1. 本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样品数相应增多。

2. 草酸盐、枸橼酸盐、EDTA二钠及氟化钠对AMS活性有抑制作用，肝素没有。待测样品中不能含有AMS抑制剂，同时需避免反复冻融。

3. 酶活性在400U以下时与底物的水解量呈线性关系，如测定管的吸光度比空白管的吸光度小1倍时，应加大样品稀释倍数或减少加入待测样品的量，重新测定，测定结果应乘以稀释倍数。

4. 本试剂盒亦适用于其他样品的AMS测定，尿液检测应先作10~20倍稀释后测定。

5. AMS Assay buffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 6个月有效。常温运输，4℃保存。