SAINT-BIO/尚宝生物 BA1085 多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒 可见分光光度法

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1085

产品规格：50管/24样

产品简介：

PPO（EC1.10.3.1）是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌，后者在410nm有特征光吸收。

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存，用前混匀；

试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤： 

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）

充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，用蒸馏水调零，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5 min沸水浴处理。

PPO 活性计算： 

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

PPO（U/mg prot）= ΔA÷0.01×V反总÷（Cpr×V样）÷T =60×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

PPO（U/g 鲜重）=ΔA÷0.01×V反总÷（W÷V样总×V 样）÷T =60×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

PPO（U/10⁴ cell）=ΔA÷0.01×V反总÷（500÷V样总×V 样）÷T =0.12×ΔA

V反总：反应体系总体积，0.9mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.15 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞数量，500万；T：反应时间，10min。

注意事项：

不同样本的多酚氧化酶Γ佳的反应温度略有差别，可在25-37℃之间进行调节。