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产品基本说明：
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蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。 羰基与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙，在 370nm 处有特征吸收峰。 |
蛋白酶羰基含量检测试剂盒（紫外分光光度法）
产品货号：BA1073
产品规格：50管/24样
产品说明：
蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
羰基与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙，在 370nm 处有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂0.1g×3支，4℃保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10个样品用量）
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（自备）
试剂六：液体50mL×1瓶，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、蒸馏水、无水乙醇和乙酸乙酯。
操作步骤：
一、样本处理
组织样品：称取约0.1g组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于 4℃，5000rpm离心10min， 取上清，加入 0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm 离心10min，取上清，然后取20μL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。
二、测定步骤
空白管 | 测定管 | |
样品（mL） | 0.2 | 0.2 |
试剂二（mL） | 0.4 | |
试剂三（mL） | 0.4 | |
混匀，37℃避光反应1h | ||
试剂四（mL） | 0.5 | 0.5 |
静置5min，4℃，12000rpm离心15min，弃上清，留沉淀。 | ||
试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀。重复3次。 | ||
试剂六（mL） | 1.0 | 1.0 |
漩涡混匀，37℃温育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm离心15min，取 | ||
三、计算：
1、按蛋白浓度计算：
蛋白质羰基含量（μmol/mg prot）=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V 样品)
=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷4.4÷Cpr；
2、按样本鲜重计算：
蛋白质羰基含量（μmol/g 鲜重）=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V 样品÷V 提取)
=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷4÷W
ε：蛋白质羰基消光系数，22mL•μmol-1•cm-1；d：比色皿光径，1cm；V：加入试剂六体积，1mL；V样品：加入样本体积，0.2mL； V提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g。
注意事项：
试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后 4℃保存，若变为黑色，则不能使用。
试剂二见光易分解，反应需严格避光。
产品介绍：
