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产品基本说明：
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蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。 羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。 |
蛋白质羰基含量检测试剂盒（微量法）
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA1074
产品规格：100管/48样
产品简介：
蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂0.1g×5支，4℃保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水震荡溶解后离心取上清使用，每支为 10个样品用量）
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（自备）
试剂六：液体30mL×1瓶，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸馏水、无水乙醇和乙酸乙酯。
操作步骤：
一、样品处理
组织样品：称取约0.1g组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20µL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。
二、测定步骤和操作表
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至370nm，试剂六调零。
2、 操作表
试剂名称（mL） | 空白管 | 测定管 |
样品 | 60 | 60 |
试剂二 | 120 | |
试剂三 | 120 | |
混匀，37℃避光反应1h | ||
试剂四 | 150 | 150 |
静置5min，4℃，12000rpm离心15min，弃上清，留沉淀 | ||
试剂五 | 300 | 300 |
漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀。重复3次 | ||
实际六 | 300 | 300 |
漩涡混匀，37℃温育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm离心 15min，取上清200µL，微量石英比色皿/96孔板，试剂六调零，测定OD370。 | ||
三、计算公式
a) 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按蛋白浓度计算：
蛋白质羰基含量（µmol/mg prot）=（OD370测定管－OD370空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V样品)
=（OD370测定管－OD370空白管）÷4.4÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
蛋白质羰基含量（µmol/g 鲜重）=（OD370测定管－OD370空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V样品÷V提取)
=（OD370测定管－OD370空白管）÷4÷W
ε：蛋白质羰基消光系数，22 mL/µmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V：加入试剂六体积，0.3mL；V样品：加入样本体积，0.06 mL； V提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
b) 用96孔UV板测定的计算公式如下：d：光径，0.6cm。
注意事项：
1、试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。
2、试剂二见光易分解，反应需严格避光。
产品介绍：
