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产品基本说明:
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。 DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在500nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。 |
二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
产品货号:BA1089
产品规格:50管/24样
产品简介:
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在500nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一 | 液体0.6mL×1支 | 2-8℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
试剂三 | 液体1.5mL×1瓶 | 2-8℃ |
溶液的配制:
试剂二:液体置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入6mL蒸馏水溶解,4℃可保存1个月。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇、研钵/匀浆器、水浴锅。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
二、测定操作表:
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。
2. 操作表
试剂名称(mL) | 对照管 | 测定管 |
样本 | 0.25 | 0.25 |
提取液 | 0.59 | 0.59 |
试剂一 | 0.01 | 0.01 |
试剂二 | 0.1 | 0.1 |
试剂三 | - | 0.05 |
无水乙醇 | 0.05 | - |
混匀,37℃水浴30min后于1mL玻璃比色皿中测定500nm下吸光度,ΔA=A测定-A 对照。 |
三、酶活性计算公式:
1. 组织DAO活力的计算
(1)按蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO(U/mg prot)=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=18×ΔA÷cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO(U/g 鲜重)=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=18×ΔA÷W
2. 血清(浆)DAO活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO(U/mL)=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=18×ΔA
3. 按细胞数量计算:
单位的定义:每104个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO活性(U/104cell)=ΔA÷d÷ε×V反总÷(500×V样÷V提取)÷T= 0.036×ΔA
V反总:反应总体积,1mL;V样本:加入样本的体积,0.25mL;V提取,加入提取液体积,1mL;cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;d:1mL玻璃比色皿光径,1cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cm;T:反应时间,30min;500:细胞总数,500万。
注意事项:
1. 如果ΔA小于0.01,适当加大提取用样本质量;ΔA大于0.8,样本可用提取液适当稀释,或者减少提取用样本质量。
2. 样品蛋白质含量需要另外测定。
产品介绍: