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产品基本说明：
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Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F，它的Γ大激发波长会向短波长处偏离10nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强一倍。 Fluo-4, AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，Γ大激发波长为 494nm，Γ大发射波长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞 仪检测细胞内钙离子浓度的变化。 |
Fluo-4,AM钙离子浓度检测试剂盒
产品货号：BA1974
产品规格：200T
产品介绍:
Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F，它的Γ大激发波长会向短波长处偏离10nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强一倍。
Fluo-4, AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，Γ大激发波长为 494nm，Γ大发射波长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞 仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
产品组成：
名称 | 规格 | 保存条件 |
5mM Fluo-4, AM | 20μL | -20℃，避光 |
20% Pluronic F127 | 20μL | 室温，避光 |
HBSS | 75mL×2 | 2-8℃ |
HEPES buffer saline | 100mL | 2-8℃ |
操作步骤：(仅供参考)
1. 向Fluo-4,AM/DMSO溶液中加入等体积的20%的Pluronic F127溶液，Pluronic F127可以防止Fluo-4,AM在HBSS中聚合并能够帮助其进入细胞。
注意：不建议在Pluronic F127中长期保存Fluo-4,AM溶液。Pluronic F127的量可以适当调整。Pluronic F127和 Fluo-4,AM一定要确保完全溶解后才可使用。
2. 用HBSS稀释Fluo-4, AM溶液，制备4-5µM的Fluo-4, AM工作液。
注意：为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用Γ低探针浓度。
3. 将Fluo-4, AM工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。
4. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
5. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×105cells/mL的溶液。
6. 37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长506nm，发射波长526nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定Γ佳条件。以上方法仅供参考。
注意事项:
1. 如果使用含有血清的培养基，血清中的脂酶会分解AM体，从而降低Fluo-4, AM进入细胞的效果。另外，含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前，应该尽量去除培养基残留。
2. 荧光染料均存在萃灭问题，请注意避光，以减缓荧光萃灭。
3. Fluo-4,AM/DMSO溶液低温状态下会凝固，需完全融化后使用，可以水浴加热使其溶解，不影响实验结果。
有效期：12个月。
产品介绍：
