SAINT-BIO/尚宝生物 BA1102 脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）

脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）

产品货号：BA1102

产品规格：100管/96样

产品简介：

脯氨酸（Pro）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆 育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在520nm测定吸光度。

技术指标： 

Γ低检出限：0.2876μg/mL

线性范围：0.5-30μg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、冰乙酸、甲苯、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

溶液的配制：

1. 试剂一：自备冰乙酸。

2. 试剂三：自备甲苯。

3. 标准品：脯氨酸10mg，临用前加入1mL蒸馏水，配成10mg/mL标准品。

操作步骤 (仅供参考) ：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 

1. 细胞、细菌或组织样本的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min；10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

2. 血清（浆）样本：取0.1mL血清（浆）加入0.9mL提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10分钟，10000g， 常温离心10分钟，取上清，冷却后待测。

二、测定步骤 

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，分光光度计用甲苯调零。

2. 标准品的处理：将标准品用蒸馏水稀释为30、20、10、8、4、2、1、0μg/mL。

3. 取0.25mL上清液或标准品溶液+0.25mL试剂一+0.25mL试剂二于2mL有盖EP管中，置沸水浴中保温30min （盖紧，防止水分散失），每10min振荡一次。

4. 待冷却后，加入0.5mL试剂三，振荡30s，静置片刻，使色素转至试剂三中；吸取0.2mL上层溶液于微量玻璃比色皿或96孔板中，于520nm波长处比色，记录吸光值A。

5. 根据标准品吸光值和浓度，建立标准曲线。

三、Pro含量计算：  

1. 通过标准曲线计算样本脯氨酸含量(y为脯氨酸含量，μg/mL；x为OD值)

2. 按照细菌、细胞数量计算

细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/10⁴cell)=y×V提÷细胞/细菌数量= y÷细胞/细菌数量

3. 按照组织质量计算

Pro含量(μg/g 质量) =y×V提÷W=y÷W

4. 按照血清（浆）体积计算

Pro含量（μg/mL）=10×y

V提：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；细胞/细菌数量：以10⁴为单位，万个；10：血清稀释倍数，（0.1+0.9）÷0.1=10。

注意事项： 

1. 提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。