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产品基本说明:
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中,前者与酸性茚三酮共热发生反应,产生稳定的红色产物,以分光光度计测定520nm处吸光度值,在一定浓度范围内颜色深浅与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量,仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 |
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)
产品货号:BA1585
产品规格:50T
产品简介:
脯氨酸(Proline,Pro)是一种环状的α-亚氨基酸,呈中性,等电点为6.30,水中溶解度比任何氨基酸都大,25℃时100g水中可溶162g左右,易潮解不易得结晶,有甜味。脯氨酸与茚三酮溶液共热,生成黄色化合物,一旦进入肽链后,可发生羟基化作用,从而形4-羟脯氨酸,是组成动物胶原蛋白的重要成分,羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中,尤其与细胞壁的形成有关,在正常情况下脯氨酸含量较低,但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等),
常有脯氨酸的明显积累,即积累指数与植物的抗逆性有关,在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中,前者与酸性茚三酮共热发生反应,产生稳定的红色产物,以分光光度计测定520nm处吸光度值,在一定浓度范围内颜色深浅与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量,仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品名称 | 50T | 保存条件 |
试剂(A): 脯氨酸标准(100μg/ml) | 1ml | 2-8℃ |
试剂(B): PRO Lysis buffer(5×) | 50ml | 室温 |
试剂(C): PRO Assay buffer | 50ml | 室温 |
试剂(D): 茚三酮 | 1.3g | 室温,避光 |
试剂(E): 茚三酮稀释液 | 50ml | 室温 |
自备材料:
1. 蒸馏水或去离子水、甲苯或二甲苯
2. 电子天平、研钵或匀浆器、滤纸或纱布
3. 离心机、带螺旋盖的离心管或试管、水浴锅或电热炉
4. 分光光度计、比色杯(不宜用塑料的)
操作步骤 (仅供参考) :
1. 配制PRO Lysis buffer(1×):取1份PRO Lysis buffer(5×)加4份去离子水混匀即成。
2. 配制茚三酮显色液: 取出1支茚三酮,准确溶解于50ml茚三酮稀释液,70℃加热搅拌至完全溶解,混匀,即为茚三酮显色液。4℃避光备用,48h 有效。注意:茚三酮稀释液具有一定腐蚀性,请小心操作。如果2天内用不完,可以称取一定量的茚三酮,加入茚三酮稀释液使终浓度为2.4~2.6%即可。
3. 准备样品:
①植物样品:取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,切碎,迅速称取0.5g,加入5ml PRO Lysis buffer(1×)后匀浆或研磨,沸水浴10min(期间经常摇动),混匀,用滤纸或纱布过滤,滤液即为脯氨酸提取液,4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存,用于脯氨酸的检测。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用PRO Lysis buffer(1×)进行适当匀浆,留取上清即脯氨酸提取液,用于脯氨酸的检测。4℃保存备用,3天有效。
④高活性样品:如果样品中含有较高浓度的脯氨酸,可以使用PRO Lysis buffer(1×)进行恰当的稀释。
4. 配制系列脯氨酸标准溶液:取出脯氨酸标准(100μg/ml)恢复至室温后,用去离子水稀释为脯氨酸标准(10μg/ml),再按下表进行梯度稀释:
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
脯氨酸标准(10μg/ml) | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 | 0.8 |
蒸馏水 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0.4 | 0.3 | 0.2 |
脯氨酸浓度(μg/ml) | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
5. PRO加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测Γ好能设置平行管。
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 待测管 |
蒸馏水 | 1 | - | - |
系列脯氨酸标准(1~7号) | - | 1 | - |
脯氨酸提取液 | - | - | 1 |
PRO Assay buffer | 1 | 1 | 1 |
茚三酮显色液 | 1 | 1 | 1 |
混匀,沸水浴30min,溶液呈红色。 |
6. PRO测定:迅速冷却加入2~3ml甲苯或二甲苯,振摇30s,静置片刻,取上清液转移至新的离心管或试管,3000r/min 离心10min,取上清液备用。以空白管调零,520nm处用分光光度计(1cm光径比色杯)测定标准管和测定管的吸光度。注:加入甲苯或二甲苯的量前后应统一;空白管和标准管不用离心,可直接取上清液测定。
计算:
以系列脯氨酸标准(1~7号) 浓度(μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,制作标准曲线,根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸浓度。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量:
植物组织样品 植物组织样品 PRO(μg/g)=C×V T /W
式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸浓度(μg/ml)
V T =脯氨酸提取液总体积(ml)
W=样品鲜重(g)
血清、尿液等样品 血清、尿液等样品 PRO (μg/ml)=C×N
式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸浓度(μg/ml)
N=稀释倍数
注意事项:
1. 实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于4℃。
2. PRO Assay buffer应密闭保存,防止挥发。
3. PRO Lysis buffer(5×)、PRO Assay buffer和茚三酮稀释液都有一定腐蚀性,应小心操作。
4. 茚三酮显色液配制后可4℃避光保存48h有效。建议尽快使用或用多少配多少。
5. 本检测方法,资料中大多建议使用甲苯进行抽提反应后的红色色素,因甲苯管制或不易获得,经我公司人员进行对比实验及检测结果发现,二甲苯可有效替代甲苯进行抽提。
6. 因甲苯或二甲苯都有一定危害性,使用时应在通风橱中小心抽取,用后应及时盖紧瓶盖,防止挥发。
7. 如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定,但应考虑酶标仪的Γ大检测体积。
8. 测定时不能使用塑料的酶标条或比色皿,因甲苯或二甲苯等有机溶剂与其反应,使测定结果不准确。
9. 所测样本的 PRO 浓度过高,应用 PRO Lysis buffer(1×)稀释样品后重新测定。
10. 沸水浴的反应过程中,应使用密封性能好的带螺旋盖子的离心管,防止因密封性不好而导致水分进入;不宜使用扣盖离心管,避免因爆沸使得盖子崩开而导致水分进入;此二中原因都可能导致测定结果不准。
11. 沸水浴的反应过程中,人员不应随意接近,防止液体喷出,导致伤人事故的发生。
12. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6个月有效。4℃运输,4℃保存。
产品介绍: