SAINT-BIO/尚宝生物 BA1809 甘油三酯含量检测试剂盒（乙酰丙酮法）

甘油三酯含量检测试剂盒（乙酰丙酮法）

产品货号：BA1809

产品规格：70管/50样

产品简介：

甘油三酯（TG）是由长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要的呼吸底物和供能物质，在脂肪酸运输过程中具有重要作用。血清中内源性甘油三酯主要以VLDL形式运输，外源性甘油三酯主要以CM形式运输，甘油三酯含量的增高与动脉粥样硬化性心血管疾病密切相关。

甘油三酯经KOH皂化水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在铵离子存在下甲醛 能够与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，产物在420nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量 检测甘油三酯的含量。

产品组成：

溶液的配制：

1. 试剂一：按正庚烷:异丙醇=1:1的体积比配制（棕色避光玻璃瓶配制）

2. 标准品：使用前加入1mL试剂一充分溶解（即为5mg/mL甘油三酯标准液）

3. 标准稀释液的制备：将5mg/mL甘油三酯标准液使用试剂一稀释至1.5、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/mL即为标准稀释液。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径10mm）、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴、正庚烷、异丙醇和蒸馏水。

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 甘油三酯的提取（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）

①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为（500-1000）：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或200W，超声2s，间隔1s，总时间1min），4℃ 8000g离心10min，取上清待测。

②组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1 g组织，加入1mL试剂一）处理样品，冰浴匀浆，4℃ 8000g离心10min，取上清待测。

③血清（浆）、培养液等液体样本：直接测定或适当稀释后再进行测定。

2. 测定步骤

①分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。

②在离心管中依次加入下列试剂：

注：加入试剂二后需剧烈震荡，振荡幅度、时间、反复次数以及等待分层时间均应保持一致；

吸光值测定：将反应液置于1mL玻璃比色皿中，测定420nm处吸光值，记为A测定、A标准和A空白；计算∆A测定=A测定-A空白，∆A标准=A标准-A空白。注：空白管只需测定1-2次。

标准曲线的建立：以1.5、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/mL为横坐标（x），以其对应的∆A标准为纵坐标（y），绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将∆A测定带入公式中得到x（mg/mL）。

3. 甘油三酯（TG）含量计算

①按组织蛋白浓度计算

TG含量（mg/mg prot）=x×V样总/(Cpr×V样总) =x/Cpr

②按组织样本质量计算

TG含量（mg/g）=x×V样总/W=x/W

③按细菌或细胞数量计算

TG含量（mg/10⁴cell）= x×V样总/细菌或细胞数量=x/细菌或细胞数量

④按液体样本体积计算

TG含量（mg/L）=1000×x

注释：V样总：待测样本总体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细菌或细胞数量以万计；1000：单位换算系数，1L=1000mL。

注意事项： 

1. 为确保实验结果重复性，加入试剂二后需剧烈震荡，振荡幅度、时间、反复次数以及等待分层时间均应保持一致，检测体系中65℃水浴后冷却时间应保持一致；

2. 若测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于Γ高值建议将TG待测液使用试剂一适当稀释后再进行测定，低于Γ低值建议适当增加样本量后再进行测定，计算时相应修改；

3. 检测过程中使用具有易挥发性物质，建议在通风橱中进行测定，并做好防护措施；

4. 为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。