SAINT-BIO/尚宝生物 BA1112 谷丙转氨酶（GPT）活性检测试剂盒（微量法）

谷丙转氨酶（GPT）活性检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1112

产品规格：100管/48样

产品简介：

GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被Γ卫生组织推荐为肝功能损害Γ敏感的检测指标。

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值

并计算酶活力。

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体4mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体3.5 mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体30 mL×1瓶，4℃保存；

标准品：液体1mL×1支，20µmol/mL丙酮酸钠标准品，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸水。

操作步骤：

一、样品测定的准备

1、 细胞或细菌的制备 ：

先收集细胞或细菌样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。3500g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进冰浴行匀浆。3500g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、 标准曲线的测定

首先将标准品稀释至2µmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：

3．在EP管或在96孔板中加入下列试剂

注:0µmol/mL标准管为空白管。

三、计算公式：

1、标准曲线的绘制：

以各标准溶液浓度为x轴，以∆A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A对照管）带入方程求x值。

2、GPT活性计算：

（1）按样本鲜重计算：

单位定义：每小时每g样品催化产生1µmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/g鲜重）=x×（V样本+V试剂一）÷（W×V样本÷V样总）÷T=12x÷W。

（2）按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1µmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/mg prot）=x×（V样本+V试剂一）÷（Cpr×V样本）÷T=12x÷Cpr。

（3）按血清（浆）体积计算：

单位定义：每小时每mL血清（浆）样品催化产生1µmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/mL）=x×（V样本+V试剂一）÷V样本÷T=12x。

（4）按细胞或细菌数量计算：

单位定义：每小时每10⁴个细胞或细菌催化产生1µmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/10⁴ cell）=x×（V样本+V试剂一）÷（500×V样本÷V样总）÷T=0.024x。

V样本：样本体积，0.005mL；V试剂一：试剂一体积，0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5h；500：细胞或细菌总数，万。