SAINT-BIO/尚宝生物 BA1546 果胶酶检测试剂盒（DNS比色法）

果胶酶检测试剂盒（DNS比色法）

产品货号：BA1546

产品规格：50T

产品简介：

天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin) 、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中，是细胞壁的一种组成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。果胶酶(Pectinase) 是一类分解果胶质酶类的总称，实质是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。

果胶酶(PG)检测试剂盒(DNS比色法) 检测原理是果胶酶水解果胶生成β-半乳糖醛酸，与二硝基水杨酸(DNS) 反应形成有色化合物，该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度计成正比，于分光光度计540nm处测定吸光度，通过与标准曲线比较计算出样品中果胶酶活性。该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中果胶酶，反应颜色越深，吸光度越大，果胶酶的活性越强，该50T试剂盒可以检测约23~24次样本。该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 蒸馏水

2. 实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织

3. 研钵或匀浆器

4. 离心管或试管

5. 离心机

6. 水浴锅

7. 比色杯

8. 分光光度计

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 果胶酶提取：取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品3g ，置于提前4℃入预冷的研钵或匀浆器，加入3ml 4℃的预冷的Pectinase Lysis Buffer，充分研磨或匀浆后转入离心管或试管，4℃ 10000g 离心10min，留取上清液，即为果胶酶提取液，4℃保存待用。

2. 稀释半乳糖醛酸标准液：取适量的半乳糖醛酸标准(1mg/ml) ，按下表进行稀释：

3. PG加样：按照下表设置空白管、标准管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。如果样品中的果胶酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测Γ好能设置2平行管，求平均值。

4. PG测定：立即沸水浴5min，自来水中将离心管或试管冷却至室温，以蒸馏水稀释至12.5ml ，混匀。比色杯光径 1cm，以空白调零，以分光光度计立即系列标准管、对照管、测定管在540nm处吸光度。

计算：

以1-5号管系列半乳糖醛酸标准(10 、20 、30 、40 、50 μg) 为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，直接计算直线回归方程。以测定管吸光度减去对照管吸光度的差值作为测定吸光度值(A测定) ，带入回归方程求得的测定管果胶酶含量，根据下述公式计算其活性：

组织样品的果胶酶活性( μg/ h·g)={m×V}/(W×t×V_S )

式中：m=根据标准曲线求得的测定管果胶酶含量( μg)

V=果胶酶提取液总体积(ml)

W=样品鲜重(g)

t=37℃水浴时间(h)=1

Vs=测定时所取果胶酶提取液的体积(ml)=0.5

液体样品的果胶酶活性( μg/h·ml)=m×N/V

式中：m=根据标准曲线求得的测定管果胶酶含量( μg)

N=稀释倍数

V=测定时所取果胶酶提取液的体积(ml)=0.5

注意事项：

1. 取样量、试剂用量应根据果胶含量适当调整。

2. 可溶性糖对测定结果有较大影响，应彻底去除样品中的可溶性糖。

3. Pectinase Lysis Buffer应密闭保存，避免有效成分挥发。

4. 37℃水浴1h后，应立即加入DNS显色液。

5. 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的Γ大检测体积。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。4℃ 运输，4℃保存。