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产品基本说明：
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果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中Γ重要的酶。 果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。 |
果胶酶活性检测试剂盒（可见分光光度法）
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA1131
产品规格：50管/24样
产品简介：
果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中Γ重要的酶。
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。若溶液中有不溶解物质，可以50℃水浴溶解。
试剂二：液体40mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入0.943mL蒸馏水，配成50µmol/mL的标准液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
菌类：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
液体：直接检测。
二、测定步骤：
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2. 将50µmol/mL标准液用蒸馏水稀释为6、5、4、3、2、1µmol/mL的标准溶液备用。
3. 取125µL样本沸水浴10min备用。
4. 操作表：(在1.5mL离心管中)
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
试剂一 | 500 | 500 | 500 | 500 |
50℃水浴温育5min | ||||
标准溶液 | - | - | 125 | - |
样本 | - | 125 | - | - |
蒸馏水 | - | - | - | 125 |
煮沸样本 | 125 | - | - | - |
混匀，50℃水浴反应30min，马上沸水浴5min，冷却后8000g，常温离心10min，取上清。 | ||||
上清液 | 500 | 500 | 500 | 500 |
试剂二 | 500 | 500 | 500 | 500 |
沸水浴5min，冰浴冷却终止反应，测定540nm处吸光值A，计算△A=A测定管-A对照管，△A标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。 | ||||
三、果胶酶活性计算
1. 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的△A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A带入方程得到x（µmol/mL）
2. 果胶酶活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。
果胶酶活性（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T= 2x÷Cpr。
（2）按样本质量计算
酶活定义：在50℃，pH3.5条件下，每克样品每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。
果胶酶活（U/g 鲜重）= x×V提取÷W÷T=2x÷W。
（3）按照细胞数量计算
酶活定义：在50℃，pH3.5条件下，每104个细胞每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。
果胶酶活（U/104cell）= x×V提取÷T÷细胞数量（万个）=2x÷细胞数量（万个）。
（4）按液体体积计算
酶活定义：在50℃，pH3.5条件下，每mL样本每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。
果胶酶活（U/mL）= x×V样÷V样÷T= 2x。
V提取：提取液体积，1mL；V样：加入的样品体积，0.125mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间：0.5h。
注意事项：
1. A大于1.5时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定。
2. 植物果实组织建议将样本稀释10倍或20倍后再测定。
产品介绍：
