SAINT-BIO/尚宝生物 BA1137 果糖-1,6-二磷酸（FDP）检测试剂盒（可见分光光度法）

果糖-1,6-二磷酸（FDP）检测试剂盒（可见分光光度法）

产品货号：BA1137

产品规格：50管/24样

产品说明：

果糖1,6-二磷酸（fructose-1,6-diphosphate, FDP）是糖酵解过程中的一种重要的中间产物，对多种酶具有调节 作用，具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用，广泛应用于临床医药。

醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸裂解，产物与2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在540nm处有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解后待用，用不完的试剂4℃保存，4℃保存一周；

2. 标准品：临用前加入1176μL蒸馏水充分溶解，配制成50μmol/mL果糖-1,6-二磷酸标准溶液。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰 和蒸馏水、EP管。

操作步骤 (仅供参考) ：

一、样品处理理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取 液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min 后取上清待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g 离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。

3. 血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液一，4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2. 将50µmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 µmol/mL的标准溶液备用。

3. 样本测定：(在1.5 mL离心管中操作）

三、FDA含量计算 

1. 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA带入方程得到 x（µmol/mL）。

2. FDP含量的计算：

（1）按样本质量计算

FDP含量（µg/g质量）=x×(V上清+V提取液二)×M÷(W×V上清÷V提取液一)=408x÷W

（2）按细胞数量计算

FDP含量（µg/10⁴cell）=x×(V上清+V提取液二)×M÷(V上清÷V提取液一×细胞数量(万个)) =408x÷细胞数量（万个）

（3）按液体体积计算

FDP含量（µmol/mL）=x×（V上清+V提取液二）÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）]=13.2x

V上清：提取时上清液体积，0.8mL；V提取液二：提取液二的体积，0.16mL；V提取液一：提取液一的体积，1mL；W：样本质量，g；M：果糖-1,6-二磷酸分子质量，340；V液体：液体样本体积，0.1mL。

注意事项：

1. 当ΔA测定大于0.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。